Mechanism of the glomerular injury after IgA deposition on mesangial cells in IgA nephropathy model mice

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K08588
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 金子 佳賢 新潟大学, 医歯学系, 講師 (80444157)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: IgA腎症

Outline of Annual Research Achievements

C57BL/6マウスへのBaff遺伝子導入により、血中IgA濃度が上昇し、腎糸球体メサンギウム領域にIgAが沈着することがすでに確認されている。そこで、IgA沈着後に糸球体構成細胞にどのような遺伝子が発現するかを比較検討するため、C57BL/6マウスにBaff遺伝子を有する発現ベクターまたはmock発現ベクターを遺伝子導入し、遺伝子導入１か月半および３か月後にマウスからそれぞれ糸球体を単離し、RNAを抽出し、RNAシークエンシングを行って、Baff遺伝子導入１か月半および３か月の時点での、２群間において統計学的に有意に発現上昇または発現低下している遺伝子群の同定を行った。さらに同じRNAを用いて、定量的リアルタイムRT-PCR法にて同定遺伝子の発現を比較定量しており、RNAシークエンシングで同定された各々の遺伝子について、リアルタイムRT-PCR法でも発現量変化が同様に確認された。さらにBaff遺伝子導入４か月半で同様に単離糸球体のRNAシークエンシングを予定している。また、各々の時期において、同定された遺伝子に対する特異抗体を用いて免疫染色を行い、腎組織上で遺伝子発現している糸球体構成細胞の同定を行う。これらのデータの経時的変化を確認することにより、病理学的な発症機序が明らかになることが期待されるとともに、腎組織との対応により、どの時期の遺伝子が予後予測因子となり、どの時期の遺伝子が治療ターゲットになりうるか、候補遺伝子が同定されることが期待される。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

すでにBaff遺伝子導入技術および糸球体単離技術が確立しているため。また、RNAシークエンシングの結果が定量的リアルタイムRT-PCRで再現できたため。

Strategy for Future Research Activity

前述のようにBaff遺伝子導入４か月半後の単離糸球体を用いて同様にRNAシークエンシングを行い、発現遺伝子の経時的変化を確認し、糸球体障害に関する有力な遺伝子を同定し、マウス組織を用いた免疫染色にて該当する遺伝子を発現する糸球体構成細胞を同定し、ヒト腎生検組織を用いて検証を行う。