IgA腎症の粘膜応答異常に関与する樹状細胞、B細胞およびT細胞サブセットの解明

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K08643
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 木原 正夫 順天堂大学, 医学部, 准教授 (50512604)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 仁 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10468572) ; 鈴木 祐介 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70372935)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 樹状細胞 / IgA腎症 / B細胞 / APRIL / TLR9

Outline of Annual Research Achievements

IgA腎症（IgAN）の発症・進展の鍵となる糖鎖異常IgA（Gd-IgA）の産生機序を解明すべく、粘膜免疫応答においてＴ細胞依存性および非依存性にB細胞に働きかけIgA産生に関わる樹状細胞（DC）に注目し、in vitroでの検証を開始した。IgAN自然発症モデルであるgrouped ddY (gddY) マウスおよびコントロールのBalb/cマウスの脾臓から自動磁気細胞分離装置にて単離したDCとB細胞を、DC上のToll-like receptor（TLR）9のリガンドであるCpG oligodeoxynucleotides（CpG-ODN）type A刺激/非刺激下にて共培養し、96時間後の培養上清中のIgAをELISAにて測定した。さらに、DCはセルソーターによりplasmacytoid DC（pDC)、CD8+ conventional DC（cDC）、CD11b+cDCsの脾臓における主要な3つのサブセットに分けて、IgA産生に関わる主なサブセットを検証した。更にDCにおけるTLR9やinterleukin-6、a proliferation-inducing ligand (APRIL)、B-cell activating factor belonging to the tumor necrosis factor family（BAFF）など、B 細胞機能を調節しIgA産生に関わるとこれまで報告されているDC 由来の分子の発現をquantitative PCR（qPCR）にて解析した。
結果としては、Balb/cのDCと比較しgddY由来のDC は、gddY、Balb/cいずれのB細胞との共培養においてもIgA産生を亢進させ、CpG ODN type Aの刺激によりその効果は増強することが確認された。更に、IgA産生誘導能に関してgddYマウス由来のpDCはCD8+ cDCやCD11b+cDCsと比べて優位であった。また、qPCRの検証ではBalb/c由来のDCと比較してgddYのDCでは、APRILの発現が亢進しており、cDCよりpDCで特にTLR9やAPRILの発現が亢進していた。これらの結果により、IgAN自然発症モデルにおいて、TLR9の活性化を介したAPRILによるIgA産生にpDCが主に寄与する可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

現時点で評価できている項目がmRNAの発現の段階までで、蛋白の発現を確認するには至っておらず、また病態の鍵を握るGd-IgAの産生に樹状細胞が関わるか否か評価できていない。理由としては、COVID-19パンデミックにより研究時間が割かれたことや、存在比率の低さにより樹状細胞を十分量得られず、共培養の系の進捗が遅かったことなどが挙げられる。

Strategy for Future Research Activity

pDCにより産生亢進したIgAが糖鎖異常IgAであるかWestern BlottingやELISAにて評価する。pDCがIgANの病態に寄与する主たる樹状細胞サブセットである可能性をin vitroの系にて示したのちに、gddYマウスのpDCを枯渇させることで、腎炎の程度に変化があるか否か検証していく。

Causes of Carryover

In vitroによる検証については、今年度中には間に合わず、来年度に予算計上した。