2021 Fiscal Year Research-status Report
Fabライブラリーを用いたヒトIgEの新規機能部位の探索
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20K08808
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
安藤 智暁 順天堂大学, 大学院医学研究科, 助教 (10724669)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | マスト細胞 / IgE / アレルギー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
免疫グロブリンE (IgE)とその高親和性受容体FcεRIは即時型アレルギーに関わる重要な分子である。本研究は、ヒトIgEのCε2部位が即時型アレルギー反応などにおいて重要IgE-FcεRIシグナルに果たす役割と、その機能部位を明らかにすることを目的とする。昨年度はCε2-Cε4に結合するFabライブラリーから、Cε2に結合するサブセットの選定を行い、機能アッセイをするためのツール作製を行った。本年度はこれらのサブライブラリーとツール群を用いて、機能的なスクリーニングを行った。選定されたCε2に結合するクローンは、驚くべきことにいずれもIgEのFcεRIへの結合阻害作用を示し、その阻害作用の強さは、すでに受容体に結合したIgEを剥離させる作用と比例していることが判明した。このうち作用の強い3つのクローンについて、マウスIgEへの結合性を調べたところ、マウスIgEには結合せず、ヒトIgEにユニークな領域に結合していることが判明した。そこで詳細な機能部位を探索するため、Cε2領域の7つのβシート構造をそれぞれマウスの配列に置換した組換えタンパクを作製した。また、IgEの低親和性受容体であるCD23への結合阻害作用も抗IgE抗体の臨床効果に関連する可能性が指摘されていることから、ヒトCD23を発現した細胞株の樹立を行った。これを用いてFabがIgEのCD23への結合を阻害できるか調べたところ、選択した3つのクローンいずれも結合阻害作用を示すことが判明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Fabライブラリーの機能的スクリーニング、および作用部位見当のための新規組換えタンパク質や細胞株の樹立が当初の予定通りスムーズに進行した。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は本年度の成果である組換えタンパク質や細胞株を用いて機能部位の見当を行う。結合部位が絞り込めた場合には、さらに細分化した組換えキメラタンパク質を作製し、結合部位の検討を行う。また、ヒトマスト細胞株およびヒトFcεRIを発現したマウス骨髄由来マスト細胞を用いて、実際にIgEを介した反応を抑制できるかを検討する。
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| Causes of Carryover |
一部の実験において予定よりも安価に実験が進行できたため残額が生じた。次年度の検討に必要な細胞培養、抗体、およびマスト細胞を作製するためのマウス飼育等に使用する予定である。
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[Presentation] Staphylococcus aureus d-toxin in skin promotes the development of food allergy following epicutaneous sensitization2021
Author(s)
Anna Kamei, Hiromichi Yamada, Kumi Izawa, Tomoaki Ando, Ayako Kaitani, Akie Maehara, Hexing Wang, Koji Tokushige, Shino Uchida, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura, Jiro Kitaura
Organizer
第50回日本免疫学会学術集会
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[Presentation] CD300f suppresses IgE- and mast cell-dependent allergic rhinitis2021
Author(s)
Ayako Kaitani, Takuma Ide, Kumi Izawa, Anna Kamei, Tomoaki Ando, Akie Maehara, Hexing Wang, Koji Tokushige, Maeda Keiko, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura, Jiro Kitaura
Organizer
第50回日本免疫学会学術集会
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[Presentation] Physiological expression of St6galnac1 protects mice from allergic conjunctivitis2021
Author(s)
Tomoaki Ando, Moe Matsuzawa, Saaya Fukase, Meiko Kimura, Kumi Izawa, Ayako Kaitani, Nobuhiro Nakano, Keiko Maeda, Ko Okumura, Akira Murakami, Nobuyuki Ebihara, Jiro Kitaura
Organizer
第50回日本免疫学会学術集会
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[Presentation] ：Pollen shells and soluble components play non-redundant roles in the development of allergic conjunctivitis2021
Author(s)
Saaya Fukase, Tomoaki Ando, Moe Matsuzawa, Meiko Kimura, Kumi Izawa, Ayako Kaitani, Anna Kamei, Goukyo Ou, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura, Akira Murakami, Nobuyuki Ebihara, Jiro Kitaura
Organizer
第70回日本アレルギー学会学術大会
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[Presentation] 結膜におけるシアル化酵素の生理的発現がアレルギー性結膜炎の発症を抑制する2021
Author(s)
松澤萌, 安藤智暁, 深瀬紗綾, 木村芽以子, 伊沢久未, 貝谷綾子, 中野信浩, 前田啓子, 奥村康, 村上晶, 北浦次郎, 海老原伸行
Organizer
第125回日本眼科学会総会
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[Presentation] マウス花粉性結膜炎モデルの発症における花粉の粒子性と抽出成分の重要性2021
Author(s)
深瀬紗綾, 安藤智暁, 松澤萌, 木村芽以子, 伊沢久未, 貝谷綾子, 亀井杏菜, 王合興,中野信浩, 奥村康, 村上晶, 北浦次郎, 海老原伸行
Organizer
第125回日本眼科学会総会
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