2022 Fiscal Year Research-status Report
Development of an innovative differential diagnosis method for diphyllobothriasis and taeniasis
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20K08816
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| Research Institution | Asahikawa Medical College |
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Principal Investigator |
迫 康仁 旭川医科大学, 医学部, 教授 (40312459)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 裂頭条虫 / テニア条虫 / 鑑別診断 / POCテスト |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、寄生虫の鑑別診断を臨床現場あるいは流行現場で実施するために、特殊な装置を使用せずに実施でき、複数の寄生虫を同時に鑑別診断できる方法の基盤を構築することである。まずはヒトの条虫症（裂頭条虫症およびテニア症）に的を絞り、条虫の種特異的なDNAを増幅する方法を開発するとともに、イムノクロマトグラフィー（ICT）の手法を用いて、電気泳動をすることなしに増幅DNAを分別検出する方法を開発する。
令和4年度は恒温器などの簡便な機器や保温性の高い魔法瓶を利用することでDNAの増幅が可能な等温遺伝子増幅技術であるLoop-mediated isothermal amplification (LAMP)法を用いた裂頭条虫3種（日本海裂頭条虫、広節裂頭条虫、Dibothriocephalus dendriticus）ならびにテニア条虫3種（有鉤条虫、無鉤条虫、アジア条虫）の鑑別検査法にICTスティック（（HybriDetect 2T; Milenia Biotec社）による増幅DNAの分別検出法を組合わせた検査法の精度解析を実施した。その結果、裂頭条虫3種を鑑別する検査法は特異度が高く、迅速に結果が得られる検査法であることが明らかとなった。現在は、テニア条虫3種に対する検査法の精度解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
裂頭条虫3種（日本海裂頭条虫、広節裂頭条虫、Dibothriocephalus dendriticus）ならびにテニア条虫3種（有鉤条虫、無鉤条虫、アジア条虫）のマルチプレックスLAMP法を用いた種特異的なDNA増幅検査法を開発するために、ミトコンドリアゲノム上のシトクロムcオキシダーゼ（COX1）遺伝子をDNA増幅の標的遺伝子としたプライマーを設計・選出し、その検出感度を解析した。前年度に設計した一部のプライマーは検出感度が低いことが判明し、プライマーの再設計ならびにループプライマーの利用により、感度の改善に成功した。さらにICTスティック（（HybriDetect 2T; Milenia Biotec社）を用いることで増幅DNAの分別検出が可能であることが確認できた。また、日本で入手可能な裂頭条虫試料を用いて検査法の精度解析を行ったところ、迅速に高精度の結果が得られる検査法であることが明らかとなった。以上より、研究全体としてはおおむね順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
開発した寄生虫種を鑑別検査できるマルチプレックスLAMP法とICTスティックを用いた検査法の精度に関して評価を実施する。評価には患者から得られた条虫ゲノムを出来るだけ多く使用する予定である。また、簡易な条虫ゲノムの抽出法としての定性濾過用セルロース濾紙を用いた方法の有用性について解析する。
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| Causes of Carryover |
研究打ち合わせのための外国旅費などを計上していたが、COVID-19感染症の流行により令和2年度および令和3年度に外国渡航が出来なかったため、次年度使用額が生じていた。令和4年度より海外渡航が可能となったため、インドネシアおよびタイを訪問し、本研究を実施した。しかしながら、高精度な解析を行うには、試料数ならびに海外渡航日数が不十分であったため、次年度使用額が生じた。
次年度も、COVID-19感染症の流行の状況次第であるが、「研究打ち合わせ」と「検査法の評価」のための旅費に使用する計画である。
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