2023 Fiscal Year Annual Research Report
Risk stratification of unfavorable neuroblastoma using telomere biology
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20K08927
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Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
栗原 將 広島大学, 医系科学研究科(医), 助教 (40724894)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
檜山 英三 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 特任教授 (00218744)
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Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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Keywords | 神経芽腫 / テロメア / TERT / FISH法 / MYCN / CTC |
Outline of Annual Research Achievements |
3例のMYCN増幅陽性神経芽腫の症例と11例のMYCN非増幅症例の計14例について、腫瘍培養検体においてTERT-PR(プロモーター領域)のrearrangement(再構成)について検討を行った。TERT- PR rearrangementは,Chr5.p15.33領域内のTERTの上流と下流にそれぞれ違った蛍光の標識したプローブを設計して多重染色FISH法にて検討をした。今回検討したMYCN増幅陽性群にはTERT-PR rearrangementを認める症例はなく,非増幅症例11例中2例でTERT-PR rearrangementを認めた。それぞれの症例でTERT mRNAの発現量を測定したところ,TERT-PR rearrangement陽性群では4513,5359 copies/GAPDH, TERT-PR rearrangement陰性群では0-139.5 copies/GAPDH(平均53.6)であり,明らかにTERTの発現量が増幅していた。この2症例とも治療が奏功しておらず予後不良であった。 神経芽腫の生物学的特性の層別化に関して,特にMYCN非増幅症例において本法による検討は有用と考えられるが,非常に希少な疾患であり,新規に同様の変異を認める症例が得られず,症例の蓄積を積み重ねることが出来なかった。 一方で、腫瘍の初代培養検体においてTERT-PR Rearrangementを認めた症例において,FFPEでも同様に検討を行ったところ,同様にTERT-PR Rearrangementを検出することができた。数年経過したFFPEでもFISH法にて検出が可能であったことは検体保管の簡便さで臨床応用の際に有用と考えられたが,TERT-PR Rearrangementの変異の入る頻度が少ないため判定はやや難しいと考えられた。 副次的に神経芽腫症例にてCTCの検出とTERTの変異の検出を兼ねた次世代シーケンサによる探索を行ってきたが,1つの症例で、腫瘍細胞・血中・胸水中CTCにてMYCN増幅と変異が共存していることを検出した。一細胞解析で変異細胞と野生型の増殖した遺伝子の割合にばらつきがあることがわかり,変異と増殖の機序を考えるうえで有用であった。
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