2022 Fiscal Year Annual Research Report
Tissue Engineered Islets derived from glucosensitive Beta cells
| Project/Area Number |
20K08972
|
|---|
| Research Institution | Fukuoka University |
|---|
Principal Investigator |
小玉 正太 福岡大学, 医学部, 教授 (90549338)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 智子 福岡大学, 医学部, 講師 (10380528)
坂田 直昭 福岡大学, 医学部, 准教授 (50431565)
吉松 軍平 福岡大学, 医学部, 准教授 (50569275)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 膵β細胞 / グルコセンサー / GLUT2 / MIP-GFP Tg / Glucose Uptake Probe / 高感度血糖応答性 / RNAseq / アノテーション解析 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
代用cell line(MIN6)を用いて、 Ca inflex のみの実験でsorting gate 設定を進めていた。グルコースはATP依存性K＋チャンネルによる細胞膜での脱分極が起こりCa2+チャンネルが開くことでCa2+が細胞内に流入しインスリン顆粒が分泌するため、Fura-2AM 標識されたCa2+の取り込み実験を行ない、Ca2+の流入の動態より、GULT2より取り込まれたGlucoseの反応系を捉えグルコース濃度勾配によりsortingを行う予定であった。
MIP-GFP マウスの単離膵島細胞を用いて、膵島細胞を single cell 化し cell sorting を行い蛍光強度を確認した。GFP 強度により sorting された細胞は、4分画に分かれ最も蛍光強度の高い分画集団はIns2のqPCRでの発現が高く、Beta cell 細胞として同定した。ここで、Fura-2AM 標識されたCa2+の取り込み実験を行なった所、MIN6と異なり接着細胞ではなかったため、浮遊細胞でのGlucose取り込みによるFura-2AM 標識の蛍光強度発現安定性に問題が生じた。そのため、基本実験コンセプトはそのままに、標識法を変更した。Dojindo の Glucose Uptake kit では直接 GLUT2 を介して取り込まれた Glucose probe が蛍光標識されており、浮遊細胞である single cell でも高い安定性を示した。FSC vs SSC plot作製、ダブレット除去、エリアスケール調整後、GFP vs グルコース取込指示薬 (波長 405 nm)で展開し、各細胞集団をソーティングした。Glucose 取り込み強陽性と弱陽性の差異は、各細胞集団で比較すると GFP 蛍光強度 middle と high の差異であった。
|
-
-
[Journal Article] Inhibition of NR5A1 Phosphorylation Alleviates a Transcriptional Suppression Defect Caused by a Novel NR0B1 Mutation.2022
Author(s)
Abe I, Tanaka T, Ohe K, Fujii H, Nagata M, Ochi K, Senda Y, Takeshita K, Koga M, Kudo T, Enjoji M, Yanase T, Kobayashi K.
-
Journal Title
J Endocr Soc.
Volume: 6(6)
Pages: bvac068
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
