2020 Fiscal Year Research-status Report
膵癌進展進展機構に関わるC4BPA-CD40 axisの機能解析および治療開発
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20K09073
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
佐々木 亘亮 千葉大学, 医学部附属病院, 医員 (90836181)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高野 重紹 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (20436380)
大塚 将之 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (90334185)
賀川 真吾 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (90507302)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 膵癌 / C4BPA / CD40 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1)新規早期膵癌バイオマーカーとしての血清C4BPA値測定系の確立:ヒト膵癌血清蛋白の網羅的解析により、新規早期膵癌バイオマーカーとしてC4BPAを同定した。フコシル化糖鎖をターゲットにした測定系(LCA-lectin ELISA)を確立し、感度・特異度の高い血清fucosylated (fuc) C4BPA測定系を構築し、早期膵癌バイオマーカーとしての臨床応用を目指している。
2)CD40を介したC4BPAの癌進展機構の解明:C4BPAが膵癌腫瘍に発現するCD40に直接作用し効果を示す可能性、C4BPAが抗原提示細胞上のCD40を介し腫瘍周囲の免疫を賦活化し抗腫瘍効果を増強している可能性、を考えた。ヒト膵癌切除組織の免疫染色では、C4BPA・CD40は腫瘍周囲間質に発現し、間質でのC4BPA・CD40高発現群では有意に予後良好であった。
2-1)膵癌細胞株でのCD40発現をWestern blotにて確認した。CD40特異的siRNAによりCD40発現を抑制し、さらに、CD40siRNAとrecombinant human C4BPA(rhC4BPA)を用いたstimulation assayを行うことで、膵癌細胞におけるC4BPA-CD40 axisの作用を検討している。
2-2)ヒト末梢血単核球(PBMC)を単離・調整し、rhC4BPAにて刺激した際の免疫担当細胞の分布変化をFlow cytometryにて解析する。C4BPAがCD40を刺激し、免疫担当細胞の変化を確認することで、C4BPAによる抗原提示細胞上のCD40の活性化をin vitroで確認する。
3)In vivo orthotopic transplantation modelでのC4BPA-CD40 axisの役割についての検討:YFPが内因性にlabelingされている膵癌改変マウスモデル(PKCY mice)の膵癌組織にて、マウスでのC4BPA-CD40の発現を確認した。さらに、PKCYマウスの膵臓から単離・抽出したマウス膵癌細胞PKCY cellを用いorthotopic transplantation modelを作成、recombinant mouse C4BPAを腹膜内注射した際に、 原発巣の腫瘍形成や転移形成能にどのような影響を及ぼすか解析し、C4BPA-CD40のin vivoでの役割を追求する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
1)新規早期膵癌バイオマーカーとしての血清fuc-C4BPA値測定系の確立については共同研究者にて論文発表(Oncol Lett. 2021)している。
2)CD40を介したC4BPAの癌進展機構の解明:膵癌切除組織の免疫染色を行い、臨床病理学的因子の検討を行い、腫瘍間質でのC4BPA・CD40高発現群が有意に予後良好であることを見出した。また、腫瘍周囲間質にてC4BPA・CD40が共発現していることを確認した。
2-1)ヒト膵癌細胞株でのCD40発現をWestern blotにて確認した。CD40特異的siRNAによりCD40発現の抑制にて細胞増殖能が低下することを確認した。引き続き、rhC4BPAを用いたstimulation assayを行い、膵癌細胞におけるC4BPA-CD40 axisによる機能解析を行う。
2-2)ヒト末梢血単核球(PBMC)を単離・調整し、免疫担当細胞の中でもCD4/CD8陽性細胞の培養は行えたが、樹状細胞・マクロファージの培養は現在条件設定等を検討中である。
3)In vivo orthotopic transplantation modelでのC4BPA-CD40 axisの役割についての検討:YFPが内因性にlabelingされている膵癌改変マウス モデル(PKCY mice)の膵癌組織を用いたorthotopic transplantation modelの作成に成功した。今後、recombinant mouse C4BPAを用いて、C4BPA-CD40 axisが膵がん新規治療標的になりうるかをin vivoにて追求する。
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| Strategy for Future Research Activity |
1)LCA-lectin ELISAを用いて、症例数を増やしてfuc-C4BPAのバイオマーカーとしての妥当性を検証する。
2)CD40を介したC4BPAの癌進展機構の解明:膵癌切除組織の免疫染色を行い、特に抗腫瘍免疫細胞とC4BPA・CD40との相関を検討する。
2-1)ヒト膵癌細胞株を用いたrhC4BPAを用いたstimulation assayを行い、膵癌細胞におけるC4BPA-CD40 axisによるCD40活性化の有無を検討し、どのsignal pathwayが活性化されるか検討する。
2-2)PBMCよりCD4/CD8陽性細胞、樹状細胞・マクロファージを培養し、rhC4BPA刺激時の変化をFlow cytometryにて解析する。
3)PKCY miceの膵癌組織を用いたorthotopic transplantation modelに対し、recombinant mouse C4BPAを投与した際の腫瘍量や腫瘍周囲間質での免疫担当細胞の変化を検討しC4BPA-CD40 axisが膵がん新規治療標的としての可能性を追求する。
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