2022 Fiscal Year Annual Research Report
Evaluation of Adipose-derived Mesenchymal Stem/stromal Cell Line (ASCL) therapy for hepatic ischemia/reperfusion injury and application to liver transplantation
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20K09087
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
尾原 秀明 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 准教授 (20276265)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松原 由美子 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 特任准教授 (70365427)
福田 和正 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (50348786)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 再生医療 / 間葉系幹細胞 / 虚血再灌流 / 肝移植 / 細胞シート |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ラット肝虚血再灌流モデル(70%虚血)において、虚血開始24時間前にコントロール(生理食塩水)、ASC、ASCLをそれぞれ脾臓注入したモデルを作成した。120分虚血後の生存率は、無治療のコントロール群と比べ、ASCL又はASCの前投与群では生存率が有意に上昇していた。60分虚血後のAST/ALT値は、再灌流3時間後ではASCL群はコントロール群と比較し有意に低下し、24時間後も同様に低値であった。HE及びTUNEL染色ではコントロール群と比較し、ASCL及びASCs群ではアポ トーシスと組織障害が明らかに軽減した。肝組織障害をSuzuki scoreで定量化:コントロール群に比し、ASC及びASCL群では有意にスコアが低下した。肝臓組織 のPCR検査値においいてASCL群では、TGF-β,IL-10, IL-1Raの遺伝子発現量が有意に上昇し、IL-6の遺伝子発現量は有意に減少を示した。血清のELISA測定において ASCL群ではTGF-β,IL-10の濃度が上昇し、IL-18の血清濃度はコントロール群より有意に減少を示した。肝臓組織のタンパク発現(Western blot法)において ASCL群では、NLRP3, cleaved Caspase-1, IL-1β, IL-18の蛋白量発現量が低下した。以上より、ASCLはin vivoにおいても抗炎症性サイトカインを発現すること により、虚血再灌流障害を抑制する可能性が示唆された。ASCLの脾臓注入は実臨床では投与経路として現実的ではないことから、最終年度はASCLの細胞シート化を試みた。温度応答性培養皿を使用することでシート化に成功し、ラット正常肝に貼付したところ、ASCLの生着を確認した。本細胞シートで同様の虚血再灌流実験を行い、脾臓注入群と同等の生存率改善効果が得られた。今後はラット肝移植モデルで検討する予定。
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