2020 Fiscal Year Research-status Report

羊膜を用いた虚血性潰瘍治療法の開発

Research Project

Project/Area Number	20K09138
Research Institution	Tohoku University
Principal Investigator	小笠原弘之東北大学, 医学系研究科, 大学院非常勤講師 (90868118)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	宮城重人東北大学, 大学病院, 准教授 (00420042) 齋藤昌利東北大学, 医学系研究科, 教授 (00451584) 星合哲郎東北大学, 大学病院, 講師 (10569560) 戸子台和哲東北大学, 大学病院, 助教 (50581641) 菅原宏文東北大学, 医学系研究科, 大学院非常勤講師 (60451572)
Project Period (FY)	2020-04-01 – 2023-03-31
Keywords	虚血創 / ヒト羊膜 / 血管新生
Outline of Annual Research Achievements	令和2年度に予定していたラット虚血性潰瘍モデルの作成については、Hofmannらが発表したラット虚血性潰瘍モデル（Hofmann A et al. TISSUE ENGINEERING: 2017）を参考にし、左右の腹部に虚血創を作成するラットモデルを構築した。このモデルは、動脈・静脈血流と神経系の遮断をすることで、実臨床での虚血性潰瘍に近い状態にすることが可能である。オスSprague-Dawleyラットを使用し、適切な麻酔下にラット鼡径部を切開し、片側の下腹壁動静脈・神経束を結紮切離した後に腹部皮膚全層を径1.5cmで切除するモデルとした。また、同時並行してヒト羊膜の採取と凍結保存を行い、動物実験に使用するための必要十分なヒト羊膜の採取・保存を継続して行った。上記ラットモデルとヒト羊膜を用いて羊膜の虚血性創傷に対する創傷治癒への有効性の検討を行った。実験群として、ラット虚血性潰瘍モデルの虚血創に対してヒト羊膜を移植する「虚血創移植群」と移植しない「虚血創非移植群」そして「非虚血創群」の3群に分けた。術後、創傷の面積を測定し創傷の治癒率を3群で比較し、羊膜の創傷治癒に対する有効性を検討し、さらに適切な方法で安楽死させ、創周囲と筋肉を含む創を切除。上皮化促進、血管新生促進、抗炎症の3つの観点から創傷治癒促進効果のメカニズムの検討を行った。現在、組織学的評価にて肉芽組織内の新生血管を描出し、創面積あたりの新生血管数を3群間で解析中である。また、3群の切除標本からTotal RNAを抽出して、逆転写しcDNAを採取。そのcDNAを用いてVascular endothelial growth factorに対するReal-time PCRを行い、その発現量を両群で比較検討する実験が進行中である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 実験モデルの作成は概ね予定通り行うことができたが、新型コロナウイルス感染に対する施設の対応策のため、病院内におけるヒト羊膜の採取や動物実験自体に大きな制限がなされたことにより、若干の遅れが生じていると考えている。
Strategy for Future Research Activity	実験モデルの作成やヒト羊膜移植の手技など、ほぼ全ての工程が概ね計画通りに施行し得ており、新型コロナウイルス感染に関連する諸々の制限・制約に適応しつつ、実験を継続していきたいと考えている。
Causes of Carryover	上述した理由により実験の進行が若干遅れており、そのため解析用のELISAキットや試薬の購入を次年度に先送りしたことにより次年度使用額が生じた。次年度使用額と本年度分を使用し、動物実験の追加、各種検査キットの購入、得られたデータを解析するためのハードやソフト、学会発表や論文投稿のための諸経費に使用したいと考えている。