脳梗塞発生時におけるプロポフォールの脳保護作用メカニズム

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K09238
• Research Institution: University of Yamanashi
• Principal Investigator: 三井 一葉 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (90568106)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 石山 忠彦 山梨大学, 大学院総合研究部, 准教授 (90293448)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 脳梗塞 / プロポフォール / Toll like receptor 4

Outline of Annual Research Achievements

脳梗塞は周術期に発症しやすく、患者の生命予後に重大な影響を及ぼす。脳梗塞増悪の重要な因子に炎症があり、脳内に存在するTolllikereceptor4（TLR4）は炎症を惹起する。我々は野生型マウスとTLR4ノックアウトマウスにプロポフォールを投与し、プロポフォールがTLR4経路抑制を通じて脳梗塞に保護的に作用することを示した。本研究の目的はノックアウトマウス・免疫染色・リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を用いて、TLR4を通じたプロポフォールによる脳梗塞への保護作用の具体的なターゲット細胞、その際のTLR4下流経路を検証することである。昨年度は、プロポフォールを投与することにより脳梗塞を発症したのちに、脳梗塞巣周辺で産生される炎症性サイトカインが低下するか検証した。RT-PCR装置を用いて各炎症性サイトカインがどの程度発現しているか比較検討した結果、コントロール群に比較して、プロポフォールを投与した野生型マウスにおいて炎症性サイトカインであるIL-6が有意に低下していること確認した。このことより、野生型マウスにプロポフォールを投与すると脳梗塞に対して保護的に作用する機序として、炎症性サイトカイン低下の可能性が確認された。
今年度は脳梗塞巣への炎症性細胞の集簇はプロポフォール投与により減少するか確認するため、免疫蛍光染色法を用いて検討を行った。十分な麻酔深度にした野生型マウスに左総頚動脈結紮および左中大脳動脈焼灼を行うことにより脳梗塞モデルマウスを作製した。同マウスを作製後1日目に安楽死させ脳サンプルを摘出した。抗TLR4抗体・抗CD11b抗体を用いて染色を行った。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

免疫蛍光染色法を用いて検討を行っているが、適切な画像の検出に時間を要している。

Strategy for Future Research Activity

免疫蛍光染色法の抗体の条件、撮影方法の検討を重ねていく予定である。

Causes of Carryover

免疫蛍光染色法に用いる薬剤購入にかかる費用が現時点では予定より少額であった。引き続き免疫蛍光染色法関連の必要物品の追加購入などに使用予定である。