網羅的メチル化解析で同定された頭蓋内高悪性度胚細胞腫治療標的候補分子群の機能解析

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K09380
• Research Institution: National Defense Medical College
• Principal Investigator: 富山 新太 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛, 病院 脳神経外科, 講師 (40385810)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 里見 介史 国立研究開発法人国立がん研究センター, 中央病院, 医員 (10633977) ; 市村 幸一 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 分野長 (40231146)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 頭蓋内胚細胞腫瘍 / 非ジャーミノーマ性胚細胞腫瘍 / マイクロRNA / 新規分子治療標的開発

Outline of Annual Research Achievements

頭蓋内胚細胞腫瘍（iGCT）は稀ではあるものの特に本邦で多く発症する頭蓋内悪性腫瘍群であるが、その中でも高悪性度群である非ジャーミノーマ胚細胞腫（NGGCT）に対する有効な治療法は未だ存在しない。そこで我々が設立し世界有数の症例数を保有するiCGT consortiumに集められたiCGTサンプル群に対し、本プロジェクトの予備実験としてメチル化アレイによる網羅的解析を行った結果、iGCTのなかでも特にNGGCT群で特異的に機能している可能性のあるmiR群を同定し得た。そこで今回我々は、それらのmiR機能解析を行うことにより最終的にNGGCTに対する新規分子治療標的の開発を目指した。
前年度では、網羅的メチル化解析の結果得られた３つのmiRの、２つのヒト非ジャーミノーマ胚細胞腫（NGGCT）培養細部株における機能解析を行い、その最初の段階として、これら３つのmiRを前述の２つの細胞株にてのノックダウンしたところ、細胞増殖ならびに細胞運動の抑制が確認されたことから、これらの３つのmiRはNGGCTの腫瘍特性を制御している可能性が示唆された。
この結果から今期では、前期でのmiRの実験結果に基づいた、high throughputな網羅的解析を用いたNGGCTの治療標的分子シグナル/分子と新規治療標的薬剤の同定を行うべく、そのアッセイに用いるモデル細胞を作成する目的で、同細胞群でのこれら３つのmiRの単独ないしは複数同時の恒常高発現株（もしくは同miRのmimicの発現株）ならびに３つのmiRの単独ないしは複数同時の恒常ノックダウン/ノックアウト細胞株の作成を行い、high throughput スクリーニングの途中で、今期は終了となった。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

筆頭研究者の体調の問題や、研究消耗品の調達の問題、そしてmiRの恒常高発現細胞株や恒常ノックダウン/ノックアウト細胞株の作成に思いのほか時間を要したため、当初の今期目標（miRの実験結果に基づいた、high through putな網羅的解析を用いたNGGCTの治療標的分子シグナル/分子と、新規治療標的薬剤の同定）の完遂には至らなかった。

Strategy for Future Research Activity

少なくともin vitroでの解析（３つのmiRによって制御されるNGGCTの治療標的分子シグナル/分子のスクリーニング→同定）を完遂させ、可能であればin vitroでの結果をもとにex vivo　ないしは in vivoでの実験を行い、新規治療標的薬剤の同定を目指す。

Causes of Carryover

筆頭研究者の健康問題や実験消耗費の調達の遅れ、そして予定していたスクリーニング実験の準備に遅延が生じたため、今期で行う予定であった標的分子/分子シグナルのスクリーニング実験が途中の状態で終了しておらず、その部分に使用する予定であった費用が未使用となってしまったため。