2020 Fiscal Year Research-status Report
Development of a new treatment for the patients with spinal injury accompanied by defective spermatogenesis
Project/Area Number |
20K09445
|
Research Institution | Kawasaki Medical School |
Principal Investigator |
原 綾英 川崎医科大学, 医学部, 講師 (90509340)
|
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮本 修 川崎医科大学, 医学部, 教授 (00253287) [Withdrawn]
刀袮 重信 東京電機大学, 理工学研究科, 特別専任教授 (70211399)
|
Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
Keywords | 脊椎損傷 / 無精子症 / 男性不妊症 |
Outline of Annual Research Achievements |
8週齢のSprague-Dawleyの雄ラットを用い、以下の脊髄損傷モデルを作成した。Day 1, 3, 7, 14, 28, 56, 84およびsham手術群をそれぞれ6匹ずつ作成。HE染色により造精機能評価を行った。Sham群の精巣においては、full spermatogenesisで精細管内腔に向けて、精子が容易に確認できた。一方、脊髄損傷モデルでは時間経過ともに造精機能の低下を認め、モデル作成後day 3-7では精子細胞は認めるものの1精細管に10未満 (late maturation arrest、rat Johnsen’s score 6) であった。Day 14では、精細管によっては精子細胞を認めるが、大多数の精細管では精母細胞のみとなった (early maturation arrest、rat Johnsen’s score 3-5)。Day 28になると、ごく少数の精母細胞を認めるのみとなり、精巣上体管においては、精子は皆無であった (rat Johnsen’s score <4)。Day 56、day 84 についても造精機能の自然回復はなく、精細管内は early maturation arrest のままであった。また、同様に精巣上体尾部組織での、運動精子数、精子濃度を、精子運動解析システムを用いて測定したが、sham群と比較して、モデル作成後 day 3-7で、運動精子および精子濃度の減少を認め、day 28以降では、少数の不動精子が確認できるのみであった。 これらすべての全精巣タンパクの抽出を完了した。脊髄損傷後、早期から造精機能障害が出現することがHEでの造精機能評価で確認できたため、まず、モデル後、day3-7について、2次元電気泳動及び銀染色によるタンパク解析を行った。Sham群とモデル群を比較して、モデル群において消失したスポットが5個、反対にモデル群で出現したスポットが1個、検出された。質量分析で、これらの蛋白を同定中である。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
コロナ渦のため、研究分担者のラボが、昨年数カ月稼働していなかったため。 脊髄損傷モデル作成、検体摘出、標本作成、タンパク解析を行った。タンパク解析は現在進行中である。
|
Strategy for Future Research Activity |
脊椎損傷モデルの作成は、順調に進んでいる。タンパク解析が遅れているため、研究分担者と協力して、できる限り早く結果を出す予定である。
|
Causes of Carryover |
コロナ渦中で、学会出張を見送っているため、また、研究分担者との対面での打ち合わせができない状況であり、当該年度の旅費の請求がなかった。早急に、研究結果の解析と考察、また、今後の研究計画について検討を要するため、今後、頻回な打ち合わせが必要になることが予測され、翌年度に使用予定である。 また、タンパク解析が予測より遅れているため、当該年度に使用予定の免疫染色用試薬の請求を行っていない。翌年度、使用予定である。
|