変形性膝関節症におけるS-ニトロソグルタチオン還元酵素と自然免疫系細胞の役割

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K09512
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 成尾 宗浩 日本医科大学, 大学院医学研究科, 研究生 (00772310)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 奥田 貴久 日本大学, 医学部, 教授 (20620305)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: S-ニトロソグルタチオン還元酵素 / 変形性膝関節症 / HIF2α

Outline of Annual Research Achievements

日常生活に甚大な悪影響をもたらす変形性膝関節症（OA）の発症機構解明と根治的治療法の開発に資する候補物質として、低酸素反応因子HIF2αが注目されている。本研究ではS-ニトロソグルタチオン還元酵素（S-nitrosoglutathion reductase；GSNOR)によるニトロソ化蛋白の機能変化に着目し、HIF2αのニトロソ化修飾がOA発症に与える影響に焦点をあて解析を行う。2020年度は、これまで詳細に報告されていなかった骨組織中のGSNOR発現を確認することから開始した。液体窒素を用いて破砕したマウス大腿骨遠位端をライセート化し、リアルタイム定量的PCRにてGSNORのmRNA発現頻度を確認した。ついで、ワイルドタイプC57BL/6マウスとGSNORノックアウトマウスの軟骨細胞におけるHIF2α発現頻度を、機械的に破砕した軟骨組織をさらにコラゲナーゼで処理し、flowcytometryにて測定、比較すると、ノックアウトマウスにおいてHIF2α発現が有意に多くみられた。今後はGSNORがHIF2α発現を通じて実際にOAを発症する実験系を漸次進める。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

COVID-19蔓延による移動制限、試薬調達の遅延、新規実験系の追加により、ロードマップから幾分の遅れが生じている。

Strategy for Future Research Activity

計画当初は標的遺伝子ノックアウトマウスとワイルドタイプとの2群比較を行う方針であった。変形性膝関節症としての特異性をより強調する目的で、マウス変形性膝関節症モデルを作成し、患健側差ならびに各種ストレイン間の差異を各種アッセイ、免疫組織化学で比較検討する実験系を追加する。

Causes of Carryover

COVID-19の流行により、予定していた学会、渡航ができなくなった。また、依頼予定であった研究者の移動も制限され、人件費・謝金が発生しなかった。その結果、人件費・謝金、旅費の使用額が0となり、余剰の次年度使用額が発生した。