2021 Fiscal Year Research-status Report

免疫抑制ネオセルフ化ペプチドワクチンによる膠原病、産科異常治療法の確立

Research Project

Project/Area Number	20K09598
Research Institution	Kobe University
Principal Investigator	笹川勇樹神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (40815304)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山田秀人神戸大学, 医学研究科, 非常勤講師 (40220397) 谷村憲司神戸大学, 医学部附属病院, 准教授 (80593988)
Project Period (FY)	2020-04-01 – 2023-03-31
Keywords	β2-グリコプロテインI / MHCクラスII
Outline of Annual Research Achievements	MHCクラスII分子と小胞体内のミスフォールド蛋白質の複合体が病因抗原(ネオセルフ抗原)となり、それに対する抗体(抗ネオセルフ抗体 )が自己免疫疾患を引き起こすという新しい病態論が提唱された。さらにペプチド抗原とMHCクラスII分子の複合体(ネオセルフ化ペプチド)をマウスに免疫し、抗ネオセルフ化ペプチド抗体を産生させると同抗体がT細胞レセプターとペプチド・MHCクラスII分子複合体との結合を阻害し、多発性硬化症のモデルマウスにおいて疾患発症を抑制する可能性が示されており、ペプチドワクチンという新しい治療薬として期待される。今回は不育症や産科異常症の原因となる抗リン脂質抗体症候群の新しい治療薬としてペプチド化β2-グリコプロテインIとMHCクラスII複合体に対する抗体を誘導するペプチドワクチンの開発を目指した。 Balb/cマウスにFulllengthβ2GPIを免疫するとAPSを発症するので( MiriBlanketal.J Autoimmun 1994)、Balb/cマウスにAPSを発症させてAPTTを計測する有意に延長していたためAPTTを判定項目とした。血小板減少について検討したが、凝集により測定値が異常となってしまい評価項目から削除した。Balb/cマウスに、選定した5種類のネオセルフ化ペプチドのそれぞれで免疫し、フローサイトメトリーを用いてそれぞれのマウスにTCR様抗体が産生されたかを確認した。5種類ともTCR様抗体が産生されたことを確認した。特に３種類のペプチドで力価の高いTCR様抗体が産生されたことを確認した。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 4: Progress in research has been delayed. Reason コロナウイルス感染拡大の影響で、当施設から県外への移動を自粛するように要請された。当研究は大阪大学微生物病研究所で主に行っており、兵庫県からの大阪府への移動が制限されたため研究を予定通り遂行することができなかった。
Strategy for Future Research Activity	ネオセルフ化ペプチドで免疫したマウスにTCR様抗体が産生さレていることが判明したため、今後はこれらのマウスにFull-lengthβ2GPIを免疫するとAPSを発症させ、APTT測定を用いてAPS発症率を比較し効果のあるペプチドワクチンを選択する。 β2GPI・MHCクラスⅡ分子複合体に対する抗体（抗ネオセルフ抗体）がどの部位を認識しているのかが判明することで、認識しているβ2GPIのアミノ酸配列を含むペプチドを作成することができる。より力価の高いTCR様抗体を作成できる可能性があるためβ2GPI・MHCクラスⅡ分子複合体に対する抗体（抗ネオセルフ抗体）の認識部位の特定も行なっていく。
Causes of Carryover	コロナウイルス感染拡大による影響で、県外への移動自粛を当施設より要請された。当研究は大阪大学微生物病研究所で主に行っており、県外への移動が制限されたことから予定通り研究を遂行することができなかった。また学会参加もオンラインでの参加がほとんどで旅費がほとんど掛からなかった。解析用の機材の購入(パソコン等)やソフト購入を今年度予定する。