2021 Fiscal Year Research-status Report
ゲノム編集法を用いたヒトパピローマウイルスの細胞感染機構の解明
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20K09603
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
島田 勝 横浜市立大学, 医学部, 准教授 (40301452)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山下 暁朗 横浜市立大学, 医学部, 准教授 (20405020) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | HPV / 感染 / 細胞必須因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒトパピローマウイルス（HPV）は子宮頸がんの原因ウイルスである。現在のワクチンは子宮頸がんに対する完全な予防ができていない。また、治療薬も開発されていない。そのため、次世代のHPVに対する治療・予防法が求められている。本研究計画では、以下の3つの方法を用いてHPV感染に関わる細胞因子の網羅的探索を行う。
1.HPV感染における新規同定された細胞受容体候補であるHPV-BP1の役割を詳細に解析することにより、HPVの感染過程の解明を行う。更に、HPV-BP1に対する中和抗体の作製によりHPV感染の予防法の開発を試みる。
2.タグ付きHPV遺伝子産物を細胞に導入し、質量分析法でHPVと結合する細胞因子を網羅的に同定、解析することによりHPVの感染過程、特に発がんメカニズムを解明し、HPV感染の治療法を検討する。
3.CRISPR/Cas9ゲノム編集技術によるHPV感染に関わる必須な細胞因子を同定し、HPV感染に対する次世代治療・予防法の開発を検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
１．HPV受容体候補であるHPV-BP1のHPV感染過程における機能解析： HPV-BP1の変異体、欠損細胞などを用いてHPVとの結合、感染などにおける機能を検討した。さらに、この分子に対する中和抗体の作製を行い、HPV感染の予防法の開発をしている。
２．質量分析法でHPVと結合する細胞因子を網羅的に同定、解析:本研究ではHPV E6と特異的な結合細胞因子は35個、HPV E7とは80個が同定された。それらの因子におけるHPVの細胞感染や発現との関係を更に詳しく解析している。
３．HPVの感染過程の解明：CRISPR/Cas9ゲノム編集技術の応用:単独遺伝子欠損細胞ライブラリーをTK遺伝子発現HPV粒子で感染させ、ガンシクロビルでHPVの感染に対する耐性細胞を選択する。生き残った細胞ゲノムを抽出し、横浜市立大学先端医科学研究センタ－・ゲノム解析室の協力の下、次世代シーケンサーで遺伝子解析によるHPV細胞感染に必須な遺伝子を同定した。
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| Strategy for Future Research Activity |
1.HPVに対する次世代予防・治療法の開発
遺伝子解析が順調に推移し、HPV感染発がんに関連する新規細胞因子が同定された。その機能をsiRNAを含む阻害剤により抑制することや、プラスミドベクターを用いた高発現により増強し、HPVの細胞への感染阻害およびHPVが感染している細胞のアポトーシス誘導について検討を行う。この解析により、HPV感染の予防・治療法の開発の可能性を検討する。
2.学術学会と医学雑誌で研究成果を発表し、公開する。
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| Causes of Carryover |
コロナウイルスの影響により学会の中止やオンラインへの変更が生じたため出張が減り、旅費の支出が少なかったため。
HIVに対する予防・治療法開発用の試薬購入および研究成果の発表のため、次年度の経費を計上する。
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