2022 Fiscal Year Research-status Report
ホスホイノシチド動態制御を介したヒトパピローマウイルス潜伏感染機構の解明
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20K09682
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
柊元 巌 国立感染症研究所, 病原体ゲノム解析研究センター, 室長 (70291127)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 雄彦 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (50333365)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | HPV / PTEN / ホスホイノシチド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HPV16ゲノムを保持するU2OS/HPV16細胞では、親株U2OS細胞と比べて細胞内PIP3レベルが低下したことから、HPVタンパク質がホスホイノシチド代謝酵素に影響を与える可能性を検討した。HEK293細胞にHPVのE1タンパク質を一過性に過剰発現させると、PIP3ホスファターゼであるPETNの発現レベルが減少した。一方、ATPase活性を欠失したE1変異体（K483A）ではPTENレベルに変化は見られなかった。内在性PTENを発現していないヒト子宮頸癌細胞C33AでFLAG-PTENを発現させてE1の効果を調べたところ、HPV16, HPV18, HPV58のE1発現によって、FLAG-PTENの発現がほぼ完全に消失した。E1によるPTEN分解が示唆されたことから、プロテアソーム阻害剤（MG132）及びオートファジー阻害剤（bafilomycin A1）の添加を検討したところ、いずれの阻害剤の処理下でもE1によるFLAG-PTENの消失が認められた。またHEK293細胞でE1とPTENの物理的相互作用をco-immunoprecipitationにより検討したが、E1とPTENの結合は検出されなかった。
HPV16初期遺伝子の発現が細胞内ホスホイノシチドに与える影響について解析を行った。HEK293細胞にHPV16初期遺伝子（E1, E2, E4, E5, E6, E7）の発現プラスミドを導入して、一過性に発現させた。陽性コントロールとして、PTEN発現プラスミドを導入したHEK293細胞を用いた。プラスミド導入から2日後に細胞を回収して、LC-MS/MS質量分析により細胞内のホスホイノシチド分子種の検出・定量を行った。HEK293細胞ではE1発現により細胞内のPTENが減少することから、E1発現により細胞内PIP3レベルが上昇することを予想したが、いずれのHPV遺伝子の発現によっても顕著な細胞内ホスホイノシチド分子種の量的変動は検出されなかった。一方、陽性コントロールのPTEN発現細胞ではPIP3レベルの減少が認められた。E1発現による内在性PTENの減少が十分でない可能性が考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
E1によるPTEN分解のメカニズムを明らかにできていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
各種のPTEN変異体がE1によって分解されるかを検討して、E1によるPTEN分解のメカニズムを明らかにする。
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| Causes of Carryover |
次年度も本研究を継続することになったため。また年度末納品等にかかる支払いが、令和５年４月１日以降となったため。当該支出分については次年度の実支出額に計上予定であるが、令和４年度分についてはほぼ使用済みである。
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[Journal Article] Application of organoid culture from HPV18-positive small cell carcinoma of the uterine cervix for precision medicine2023
Author(s)
Kusakabe M, Taguchi A, Tanikawa M, Hoshi D, Tsuchimochi S, Qian X, Toyohara Y, Kawata A, Wagatsuma R, Yamaguchi K, Yamamoto Y, Ikemura M, Sone K, Mori-Uchino M, Matsunaga H, Tsuruga T, Nagamatsu T, Kukimoto I, Wada-Hiraike O, Kawazu M, Ushiku T, Takeyama H, Oda K, Kawana K, Hippo Y, Osuga Y.
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Journal Title
Cancer Med
Volume: 12
Pages: 8476-8489
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Regional differences in human papillomavirus type 52 prevalence among Japanese women with cervical intraepithelial neoplasia2022
Author(s)
Kukimoto I, Onuki M, Yamamoto K, Yahata H, Aoki Y, Yokota H, Konnai K, Nio A, Takehara K, Kamiura S, Tsuda N, Takei Y, Shimada M, Nakai H, Yoshida H, Motohara T, Yamazaki H, Nakamura K, Okunomiya A, Tasaka N, Ishikawa M, Hirashima Y, Shimoji Y, Mori M, Iwata T, Takahashi F, Yoshikawa H, Yaegashi N, Matsumoto K.
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Journal Title
Jpn J Clin Oncol
Volume: 52
Pages: 1242-1247
DOI
Peer Reviewed
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