2021 Fiscal Year Research-status Report
マクロファージ極性制御による上気道線維化病変に対する新規治療技術開発
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20K09730
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
岸本 曜 京都大学, 医学研究科, 助教 (80700517)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大西 弘恵 京都大学, 医学研究科, 研究員 (50397634)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 声帯 / 線維化 / 瘢痕 / マクロファージ / 極性 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マクロファージの極性変化に影響することが報告されているPPARγアゴニストをラット物理的声帯損傷モデルに投与し、炎症期（損傷後4日）のマクロファージ極性と線維芽細胞活性への影響、および、瘢痕成熟期（損傷後2か月）の声帯粘膜固有層の組織変化を検討した。マクロファージのマーカーとしてCD68
を、炎症性（M1）マクロファージのマーカーとしてiNOSとIL-1βを、そして抗炎症性・修復性（M2）マクロファージのマーカーとしてCD206とIL10を用いた。
炎症期の評価は免疫染色とqPCRを用いて行った。マクロファージ数とCD68・CCL2（単球遊走ケモカイン）の遺伝子発現がPPARγアゴニスト投与群で有意に減少したことから、PPARγアゴニストがマクロファージの遊走を抑制することが示唆された。また、Ｍ１マクロファージの割合とIL-1βの遺伝子発現がPPARγアゴニスト投与群で有意に減少したことから、PPARγアゴニストがM1活性を抑制することが示唆された。一方、Ｍ２マクロファージの割合とIL-10の遺伝子発現は有意な差を認めなかった。TGFβ1、Col1a1、Fn1、Acta2の遺伝子発現がPPARγアゴニスト投与群で有意に抑制されたことより、PPARγアゴニストが線維芽細胞の活性を抑制することが示唆された。
瘢痕成熟期の評価には組織染色と免疫染色を用いた。瘢痕成熟期である損傷後56日目においてコラーゲン・Ⅰ型コラーゲン・フィブロネクチンの増加や、ヒアルロン酸と粘膜固有層断面積の減少がPPARγ依存的に抑制されることを確認した。
更に、ヒト単球系細胞株であるTHP-1細胞からマクロファージを誘導後、LPSとIFN-γの刺激で誘導した炎症性マクロファージにおいて、PPARγアゴニスト投与によりCcl2の発現上昇が抑制されることがqRT-PCRで確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
in vitroでの検討として、米国ウィスコンシン大学で樹立されたヒトの声帯線維芽細胞のセルラインを用いる予定であったが、COVID-19の流行の影響により輸入できなかった。そのため、in vitroでの検証は、ヒト単球系細胞株であるTHP-1細胞を用いたものだけとなっている。
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| Strategy for Future Research Activity |
再度ウィスコンシン大学にコンタクトをとり、セルラインの輸入を試みる。 また、引き続き損傷声帯に対するPPARγアゴニストの効果を検証するとともに、マクロファージの極性に影響する他の薬剤(アジスロマイシン、フェドラチニブなど)の効果に関しても検討し、マクロファージの極性コントロールが線維化に与える影響を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
COVID19流行の影響で予定したセルラインが輸入できなかったため、予定していた実験が行えず、次年度使用額が生じた。早急に再度コンタクトを取り、予定した実験を行う予定である。
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