線維柱帯細胞のエキソソームを介したシュレム管内皮細胞への影響

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K09775
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 高橋 枝里 熊本大学, 病院, 講師 (60622602)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井上 俊洋 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (00317025) ; 藤本 智和 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (50756426)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: エキソソーム / 緑内障 / 線維柱帯細胞 / シュレム管内皮細胞

Outline of Annual Research Achievements

サル線維柱帯細胞培養上清よりエキソソームを抽出し、ｍｉＲＮＡ　ａｒｒａｙを実施。コラーゲン、ＴＧＦ刺激下で上昇、下降したmiRNAのうち、１種類のｍｉＲＮＡが下降、２種類のｍｉＲＮＡの発現上昇が共通していたことを見出した。これらの３種類のｍｉＲＮＡについて、サルシュレム管内皮細胞への影響をｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎで検討した。、シュレム管における房水排出機構の一つと考えられている細胞間輸送への影響を、電気抵抗を利用したｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒ　ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅを測定したが、定常状態、TGF刺激下においてもこれらのｍｉＲＮＡはTERへの影響は認めなかった。血管内皮・リンパ管マーカーをシュレム管内皮は発現しており、さらに血管内皮間葉転換に関連する受容体、タンパクの発現への影響をqRT-PCRにより検討した。また、Ｋａｈｏｏｋ　Ｄｕａｌ　Ｂｌａｄｅを用いた線維柱帯切開術中に採取したヒト線維柱帯サンプルを用い、（倫理委員会における承認あり）電子顕微鏡を用いて線維柱帯の構造と線維柱帯細胞における小胞の有無を確認した。また、エキソソームマーカーについて免疫染色を行った。さらに、上記で同定したmiRNAの発現の有無についてｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｕｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎで検証した。これたの結果を現在Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ　Ｖｉｓｕａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 誌への投稿を準備している。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

一部施行していない実験はあるが、計画はおおむね順調に進行し、現在論文として投稿準備中である。

Strategy for Future Research Activity

投稿準備をすすめ、また、追加の実験もすすめていく。