Establishment of therapeutic strategy for corneal stromal scaring treatment by applying the NF1 (von Recklinghausen disease) gene.

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K09791
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 白石 敦 愛媛大学, 医学系研究科, 教授 (90314963)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 林 康人 愛媛大学, 医学部, 研究員 (70314953)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 角膜実質 / ケラトサイト / レックリングハウゼン病 / バイオイメージング / 透明治癒 / 遺伝子組み換えマウス

Outline of Annual Research Achievements

Cre発現細胞でneurofibromin1のexon41からexon42の遺伝子を除去できるNf1flox/floxマウスをROSA26 FUCCI2（細胞増殖期の核を緑、停止期の核を赤に標識）マウスと交配しNf1flox/flox /ROSA26FUCCI2 / FUCCI2のマウスコロニーを確立した。K5Cre（表皮細胞でCre発現）マウス、 Keratocan-IRES2-nlsCre（KINC：ケラトサイトでCre発現）マウス、およびKeratocan-IRES2-CreERT2（KICE：ケラトサイト、tamoxifen下でCre誘導）マウスをNf1flox/flox/ROSA26mTmG / mTmGおよびNf1flox/flox /ROSA26FUCCI2 / FUCCI2と交配し、6種類のマウスK5Cre/ Nf1flox/flox /ROSA26mTmG / wild 、KINC/Nf1flox/flox / ROSA26mTmG / wild 、KICE /Nf1flox/flox /ROSA26mTmG / wild 、K5Cre/ Nf1flox/flox /ROSA26 FUCCI2 / wild 、KINC/Nf1flox/flox / ROSA26 FUCCI2 / wild およびKICE /Nf1flox/flox / ROSA26 FUCCI2 / wildとそのコントロール（Nf1flox/wild)を作製した。KICEに対しては、tamoxifen誘導を行い（0.25mg/g・body weight in corn oil)、これらのマウスを全身麻酔下で上皮剥離後、共焦点顕微鏡または2光子顕微鏡で経時的にケラトサイト、上皮、炎症細胞、神経の形態とケラトサイト及び角膜上皮細胞の増殖をコントロールと比較した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

6種類のマウスK5Cre/ Nf1flox/flox /ROSA26mTmG / wild 、KINC/Nf1flox/flox / ROSA26mTmG / wild 、KICE /Nf1flox/flox /ROSA26mTmG / wild 、K5Cre/ Nf1flox/flox /ROSA26 FUCCI2 / wild 、KINC/Nf1flox/flox / ROSA26 FUCCI2 / wild およびKICE /Nf1flox/flox / ROSA26 FUCCI2 / wildとそのコントロール（Nf1flox/wild)の作製ができている。

Strategy for Future Research Activity

KICEに対しては、tamoxifen誘導を行う（0.25mg/g・body weight in corn oil)。これらのマウスを全身麻酔下で上皮剥離後、共焦点顕微鏡または2光子顕微鏡で経時的にケラトサイト、上皮、炎症細胞、神経の形態とケラトサイト及び角膜上皮細胞の増殖をコントロールと比較検討する。