2021 Fiscal Year Research-status Report
新規血管細胞制御シグナル伝達に介入する網膜脈絡膜血管病治療法の開発
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20K09837
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
高木 均 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (70283596)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北岡 康史 聖マリアンナ医科大学, 医学研究科, 教授 (10367352)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 糖尿病網膜症 / 血管新生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今回検討するNorrin、Fz4、Tspan12、Lrp5の抑制はNorrie病やFEVR患者のみならず遺伝子ノックアウトマウスにおいても血管の伸展障害や脆弱血管の形成から増殖網膜症に進行する。我々が標的とする糖尿病網膜症や脈絡膜新生血管などに見られる血管の未成熟化や増殖などの血管病態と酷似する部分が多い。従ってその分子の発現やシグナル伝達機構の異常を同定することで全く新しい病態メカニズムの解明と治療法開発につながることが予想され着想に至った。
そこでNorrin /Frizzle4/ Lrp5/Tspan12系に焦点をあて、HUVECにおける高血糖状態、低酸素状態におけるRNAシークエンスデータ、そしてマイクロアレイデータで関連遺伝子群を検討した。
グルコース5.5.mMと50mM（高血糖）と比較したRNAシークエンスのデータから、TSPAN12は0.96(High glucose/Low glucose)、FZD4は1.11、LRP5は0.85で有意に上昇や低下を認めているものはなかった。また、NDPはFPKM0.5以下であり、HUVECにおける発現量はかなり低いと考えられた。
Hypoxia condition(O2 0.5%)におけるマイクロアレイデータ(GSE35932)においてもTSPAN12は0.91(Hypoxia /Normoxia)、FZD4は0.73で優位に上昇や低下を認めているものはなかった。
HUVECにH2O2を投与したコンディションでのマイクロアレイデータ（GSE104664）でも検討したが、FZD4 1.29 (H2O2 / control), LRP5 1.54, TSPAN12 1.23と大きな変化はしていなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
高血糖、低酸素、H2O2でのトランスクリプトーム解析での変化は認められず、今回までのデータでは我々の仮設を立証することはできなかった。今後はsiRNA（Norrin、Fz4、Tspan12、Lrp5）を用いて内皮細胞、周皮細胞の細胞接着の状態などを検討していく。
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| Strategy for Future Research Activity |
siRNAを用い、Norrin、TSPAN12、FZD4、LRP5をノックダウンさせた状態でTEER（経上皮電気抵抗）測定やOccludin、VE-Cadherinなどの免疫染色などを行い、糖尿病網膜症において重要である細胞接着分子への影響を検討する。
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| Causes of Carryover |
試薬、実験消耗品等が研究室で以前から使用しているものを優先して使用したため予定より経費が抑えられたため。今後は siRNA、免疫染色に必要な試薬等の購入をする予定である。
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