2020 Fiscal Year Research-status Report
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20K10020
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| Research Institution | The Nippon Dental University |
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Principal Investigator |
辻村 麻衣子 (羽下麻衣子) 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (60535219)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中原 賢 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (20610257)
今井 あかね 日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 教授 (60180080)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 歯科インプラント / 抜歯 / 味覚 / 有郭乳頭 / 味蕾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
歯科治療後の味覚や舌の組織の変化には不明な点が多く、検索の余地がある。抜歯やインプラント埋入による味覚変化についての情報は、インプラント治療の予後を考えるうえで重要となるため、本研究ではまず、抜歯後の味覚変化を明らかにするための実験を行うこととした。本年度は、抜歯モデルを作製し、モデルから採取した舌の一部の変化を解析した。
具体的には以下のように実験を進めた。Wistar系雄性ラットの上顎臼歯を抜去し、一定の治癒期間の後、安楽死させ、舌の有郭乳頭とその周囲の組織を一塊として採取した（抜歯群）。同様に、コントロールとして、抜歯を行わず一定期間飼育したラットの有郭乳頭周囲の組織を採取した（非抜歯群）。両群の試料に対して、iTRAQ試薬を用いたタンパク質発現・相対定量解析を委託した。
その結果、同定されたタンパク質のリストと比較定量のデータを得た。非常に多くのタンパク質が同定され、その中には抜歯群で増加していたタンパク質も、逆に減少していたタンパク質も存在していた。一方、味細胞のマーカーとして用いられるタンパク質は検出不可能あるいは差がほとんどないという結果であった。この結果については、今回採取した範囲が、味蕾を含む上皮以外の部分を多く含んでいることも大きく影響していると考えられるため、今後は味細胞のマーカーの免疫染色などの詳細な検索を行い、味細胞の変化を確認する予定である。また、本年度iTRAQ試薬を用いた解析で差がみられたタンパク質に関しても、さらに検討していきたい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は、新型コロナウイルス感染症の影響で、研究の開始が遅れたため、その間、文献検索などを行いながら、研究計画を再考し、動物モデルの作製、 iTRAQ試薬を用いた網羅的なタンパク質の発現解析を進めることとした。その結果、今後の研究の方向性を決めるうえで有用な情報が得られたが、組織学的解析を行うことができなかったため、上記のように判断した。次年度以降、本年度の結果をもとに組織学的手法と生化学的手法を用いて、定性的・定量的な検索をさらに進めたいと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
インプラント埋入と抜歯の深い関連を考慮し、引き続き抜歯モデルと非抜歯モデルの比較を行う。
今後ターゲットにすべきタンパク質を明らかにするため、本年度は、iTRAQ試薬を用いた網羅的なタンパク質の同定と比較定量を行った。次年度も、本年度得られたデータの解析をさらに進める一方、本年度同様の抜歯モデルを作製し、組織学的手法を用いて、抜歯による舌の変化に関する検索を進めたいと考えている。具体的には抜歯群と非抜歯群のラットから採取した組織にH-E染色や味細胞のマーカーに対する抗体を用いた免疫染色などを行い、形態変化や性質の変化の有無を確認する予定である。iTRAQ試薬を用いた解析にて抜歯群と非抜歯群で差が認められたタンパク質の免疫染色も行いたい。実験を進めていくなかで、治癒の確認が必要であると判断された場合には、抜歯窩とその周囲骨を解析する。
研究計画は随時見直し、重点的に検索する組織や免疫染色に用いる抗体の変更、生化学的解析の追加など、必要に応じた修正を加えることも考えている。実験は研究代表者が中心となって進めていき、一部は研究分担者が担当する。また、所属講座の教員や大学院生などにも協力してもらう予定となっている。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウイルス感染症の感染拡大により、研究開始が遅れたため、研究計画を若干変更して、上記の実験を行った。そのため、本年度は切片の作製や染色、ウエスタンブロッティングなどを行わず、モデルの作製も少なかったため、次年度使用額が生じた。次年度以降は、舌の切片を作製し、組織学的に観察する予定である。また、生化学的解析も計画している。したがって、繰越分を含めた交付金は、ラットの購入や切片作製のための物品の購入、免疫染色やウエスタンブロッティングのための抗体の購入などの費用にあてる。
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