2022 Fiscal Year Research-status Report
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20K10020
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| Research Institution | The Nippon Dental University |
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Principal Investigator |
辻村 麻衣子 (羽下麻衣子) 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (60535219)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中原 賢 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (20610257)
今井 あかね 日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 教授 (60180080)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 歯科インプラント / 抜歯 / 味覚 / 有郭乳頭 / 味蕾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
抜歯やインプラント埋入による味覚変化についての情報は、インプラント治療の予後を考えるうえで重要である。本研究では、抜歯後の味覚変化を明らかにするため、上顎臼歯を抜去したラット（抜歯群）と抜歯せずに全身麻酔薬とその拮抗薬の投与のみを行ったコントロールのラット（非抜歯群）を用いて実験を進めている。これまで有郭乳頭を含む舌の一部に対して、iTRAQ試薬を用いたタンパク質発現・相対定量解析、浸漬固定後に作製した凍結切片での免疫組織化学などを試みてきた。抜歯により味蕾が変化するとの報告があることから、味蕾に存在する味細胞も抜歯で変化することが予想されるが、これまでの実験では味細胞の変化の有無を明らかにできていない。そこで本年度は、味覚を受容する味蕾の味細胞の変化に着目し、以下のような実験を行った。
まず、抜歯群と非抜歯群の両群を灌流固定し、有郭乳頭を含む舌の一部を採取した。採取した試料をパラフィン包埋し、薄切した。作製したパラフィン切片に対して、味蕾のⅢ型細胞のマーカーとされているneural cell adhesion molecule（NCAM）に対する免疫染色などを行った。実験は現在進行中である。また、何の処置もしていない（未処置の）ラットを灌流固定し、有郭乳頭を含む舌の一部を採取した後、作製した凍結切片に味細胞のマーカーとされているNCAM、gustducin、vesicle-associated membrane protein 2などの抗体を用いて、蛍光抗体法による多重染色を行っている。未処置のラットに対する蛍光多重免疫染色を継続することで、味蕾に存在する味細胞の特徴を明らかにし、本研究の考察を深めたいと考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
抜歯後の味覚変化を明らかにするために、本年度はラットの有郭乳頭を用いた免疫染色を行った。しかし、研究遂行に想定以上に時間を要し、新型コロナウイルス感染症の影響で生じた遅れを取り戻すことができなかった。本年度で研究を終わらせることができず、研究の期間を延長することとなったため、やや遅れていると判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度も免疫組織化学により抜歯群と非抜歯群の味蕾を比較することで、抜歯による味蕾の変化の有無を明らかにする予定である。さらに、その結果を踏まえて、生化学的解析を行いたい。具体的には、味細胞のマーカーに関する解析やiTRAQ試薬を用いた網羅的なタンパク質の同定と比較定量において、抜歯群と非抜歯群で差が認められたタンパク質に関する解析を加えたいと考えている。また、未処置のラットを用いた味蕾の実験については、その成果を論文としてまとめたいと考えている。
これまで同様、研究計画は随時見直し、修正を加えながら進めていく。実験は研究代表者と研究分担者が行い、研究代表者の所属講座の教員や大学院生にも協力してもらう予定である。
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| Causes of Carryover |
本年度は抜歯群と非抜歯群のパラフィン切片を作製し、免疫染色を行った。実験は研究代表者らが日常的に行っている方法によるもので、既に所有している材料を多く用いることができたため、その分の費用が浮いた。また、味蕾の特徴を解明するために、未処置のラットでの実験を並行して行ったが、この実験についても、すでに手技を確立しているため、使用する器具や消耗品にかかる費用が抑えられた。このような理由から、次年度使用額が生じた。
次年度も舌の有郭乳頭の切片を用いて、組織学的に解析する。また、生化学的解析も行いたいと考えている。これらの解析を進めていき、最終的には論文として成果をまとめ、投稿する予定であるため、繰越分を含めた交付金は、実験を継続するための物品の購入にかかる費用と論文作成や投稿に関わる費用にあてる予定である。
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