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2022 Fiscal Year Annual Research Report

Comprehensive analysis of salivary exosome proteins for drug delivery system development

Research Project

Project/Area Number 20K10174
Research InstitutionTHE NIPPON DENTAL UNIVERSITY COLLEGE AT NIIGATA

Principal Investigator

今井 あかね  日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 教授 (60180080)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 筒井 紀子  日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 講師 (00352782) [Withdrawn]
煤賀 美緒  日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 助教 (00723678)
辻村 麻衣子 (羽下麻衣子)  日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 教授 (60535219)
岡 俊哉  日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (90213909)
浅沼 直樹  日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 教授 (90231886)
Project Period (FY) 2020-04-01 – 2023-03-31
Keywordsエクソソーム / 唾液 / タンパク質 / 精製法 / SAS細胞
Outline of Annual Research Achievements

エクソソームは細胞外小胞の1つであり、細胞間情報伝達システムとして注目されている。唾液中エクソソームは口腔内のみならず消化器の上皮細胞を通して全身に情報を伝達している。さらには個体間の情報伝達も可能である。本研究では新規ドラッグデリバリーシステム構築の足がかりとするため唾液エクソソームに着目して、その組成から細胞間物質輸送システムを考察・解明することを目的とした。しかしながら、唾液には多くのタンパク質が存在しており、約100 nmの粒径であるエクソソームを単離して内包されているタンパク質を解析するには困難な状況であった。令和4年度は本研究課題の最終年であるため、その精製法・機能・役割について検討した。精製法では、超遠心分離機およびゲル濾過カラムを用いて唾液エクソソームを精製し、これまでの調製法より精製度の高いエクソソームを分離することに成功した。唾液エクソソーム精製には、ペレットダウン超遠心法(PDUC)の後、ゲル濾過カラムに付し、フラクションコレクターを用いて分画してエクソソーム画分(qEVエクソソーム)を得た。全唾液・PDUCエクソソーム・qEVエクソソームをLC-MS/MSショットガン解析して含有するタンパク質を比較検討した。これによりエクソソーム外の唾液タンパク質をかなり除去することができ、安定的なエクソソームの調製が行え、これまで検出できなかったRabをはじめとする細胞融合に関連するタンパク質を確認することができた。
また、舌がん由来細胞株(SAS細胞)が放出するエクソソームとの比較も行った。SAS細胞の培養上清(SAS)よりPDUC法によりエクソソームを調製した。エクソソームマーカータンパク質のウエスタンブロッティングによりエクソソームを確認した。SASおよび唾液エクソソームのタンパク質発現において相違を確認できたことより、臨床検査検体としての可能性が示唆された。

  • Research Products

    (8 results)

All 2023 2022

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] 若年女性の口腔内歯周病原菌叢の変化と歯冠色明度との関係性について2022

    • Author(s)
      時田 実河、煤賀 美緒、元井 志保、佐藤 治美、今井 あかね
    • Journal Title

      日本口腔保健学雑誌

      Volume: 12 Pages: 16~22

    • DOI

      10.32303/jnohs.12.1_16

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 舌ブラシ別の細菌除去量と効果的な洗い方に関する研究2023

    • Author(s)
      相澤萌々子,煤賀美緒,今井あかね
    • Organizer
      第54回歯科衛生研究会
  • [Presentation] 唾液分泌と成分に対する視覚および視聴覚刺激の影響について2023

    • Author(s)
      清野可那子,宮崎晶子,今井あかね
    • Organizer
      第54回歯科衛生研究会
  • [Presentation] 唾液エクソソーム精製と内包タンパク質について2023

    • Author(s)
      今井あかね,岡 俊哉,煤賀美緒,嵐 聖芽,浅沼直樹
    • Organizer
      第54回歯科衛生研究会
  • [Presentation] オーラルヘルスケアに役立つフコイダンの特性2023

    • Author(s)
      岡 俊哉,螺良修一,今井あかね
    • Organizer
      第54回歯科衛生研究会
  • [Presentation] 超遠心分離機およびゲル濾過カラムを用いた唾液エクソソーム精製と含有タンパク質の違いについて2022

    • Author(s)
      今井あかね, 竹澤 晴香, 岡 俊哉, 辻村 麻衣子
    • Organizer
      第66回日本唾液腺学会学術集会
  • [Presentation] 唾液エクソソームの調製法と舌がん由来細胞株エクソソームとの比較2022

    • Author(s)
      今井 あかね, 竹澤 晴香, 岡 俊哉, 辻村 麻衣子
    • Organizer
      第64回歯科基礎医学会学術集会
  • [Presentation] オーラルヘルスケアに役立つ海藻由来薬効成分フコイダンの特性2022

    • Author(s)
      岡 俊哉, 螺良 修一, 今井 あかね
    • Organizer
      第95回日本生化学会大会

URL: 

Published: 2023-12-25  

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