樹状細胞サブセットを指標とする皮膚損傷受傷後経過時間判定法の確立

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K10560
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 國中 由美 和歌山県立医科大学, 医学部, 特別研究員 (60843282)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 受傷後経過時間 / 樹上細胞

Outline of Annual Research Achievements

マウスをペントバルビタール（50 mg/kg，腹腔内投与）により麻酔し，剃毛した背部皮膚に直径4 mmの打ち抜き損傷を作製した．損傷作製後経時的にマウスを頚椎脱臼により安楽死させ，損傷部組織を採取した．対照試料は損傷を作製していないマウスの正常皮膚より採取した．経時的に採取した皮膚損傷部を用いて，パラフィン包埋切片を作製し，各切片について，DEC205に対する抗体を用いて総DCを検出した．顕微鏡下（×200）１視野におけるDEC205陽性樹状細胞数を検討したところ，受傷後６日目で最も多数であった．基礎的研究結果に基づいて皮膚損傷治癒過程におけるDCの時間的・空間的出現様態を解明することにより，法医実務的研究へと発展させるため，法医剖検例（ヒト皮膚損傷部試料および対照試料）の収集に努めている．

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

2020年度は，主にマウスを用いた実験を行うとともにヒト剖検試料の収集に努めることを目標としており，概ね順調に進展している．応募者らは剖検試料収集についてはすでに開始しており，効率的に研究を進めることができる．

Strategy for Future Research Activity

研究計画を鋭意継続しながら法医実務への応用研究として，法医剖検例において受傷後経過時間が判明している皮膚損傷部試料について，基礎的研究で得られたDC検出に適した抗体を用いて免疫組織化学的検討を行う．さらに，適切な抗体の組み合わせによる蛍光二重免疫染色法を用いて，より特異的なDCの検出を試みる．動物実験の結果と実務的研究の結果を総合的に考察し，DCの出現様態と受傷後経過時間の関連性について統計的解析を行い，DCを指標とする受傷後経過時間判定法を確立する．