2020 Fiscal Year Research-status Report
Development of a method to predict the severity of nonalcoholic fatty liver disease by measuring body composition and microRNA
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20K11531
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
米山 弘人 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (80294750)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩間 久和 香川大学, 医学部, 准教授 (20398035)
正木 勉 香川大学, 医学部, 教授 (30335848)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 非アルコール性脂肪肝炎 / 体組成計測 / マイクロRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
食生活習慣の欧米化で急増している非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）の中から肝関連死亡率が非常に高い非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を発症する高危険群を正確に選別する簡便な診断法の開発を目標とし、健康医学や患者指導の場で広く活用されている体組成計測と新規バイオマーカーの血清マイクロＲＮＡ(miRNA)測定を組み合わせた斬新なＮＡＳＨ発症予測法の確立に着手しました。
当施設で病理診断されたNAFLD/NASH患者50名（NASH25名、非NASH 25名）に栄養指導と共に生体電気インピーダンス法で体組成計測を行い、体脂肪と筋肉量から体組成型を分類すると同時に患者血清を採取保存しその血清マイクロRNA（miRNA）を網羅的に解析した。miRNAの解析は約2600分子種のmiRNAを搭載したオリゴチップに、血清から精製した資料をハイブリダイゼーションした後にmiRNA解析専用スキャナーで取り込み、各miRNA分子種の発現強度を測定した。体組成計測では全症例が5つの型に分類され、各体組成型の症例の病理組織型からＮＡＳＨ症例と非ＮＡＳＨ症例を区別し、ＮＡＳＨ－非ＮＡＳＨ間で各miRNAの発現強度を比較解析したところ、ＮＡＳＨ症例で特異的に発現強度が変化しているmiRNA分子種複数同定できた。更にそれらのmiRNA分子種が体組成型において少しずつ異なる事を示唆するデータが得られた。
しかし残念ながら解析症例の約半数の保存血清において、検体量不足からmiRNA解析に必要な精製試料を確保できず、エントリーした50名の内約半数において未測定となってしまった。急遽症例集積の追加を行っており令和3年5月末ごろまでには統計的解析を行える検体数が揃うペースで研究を継続しています。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究は予定通りに進めましたが、保存血清からmiRNA網羅的解析の段階で測定に必要なサンプル量が得られない症例が多数出てしましました。保存試料から精製する段階で、予定していた手法では予想より精製試料の収率が悪く、方法を改良しても保存血清から十分なmiRNA解析ができた症例は約半数しかありませんでした。そこで急遽症例の追加エントリーを行い、症例収集再開し現在も継続しています。
予定では体組成計測で分類した体組成型の各グループにおいてNASH―非NASH間で発現強度が有意に変化しているmiRNA分子種を同定し、体組成計測と血清miRNA解析を組み合わせたNASH予測アルゴリズム作成に着手している段階でしたが、上記の経過にてまだその前段階までしか研究が進んでいません。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は追加集積した症例のmiRNA解析を完了させ、体組成判定と特定のmiRNA発現パターンからＮＡＦＬＤの重症度（NASH発症）予測ができるアルゴリズムを作成する予定です。
更に今年度は長期フォロー期間中にNASH発症前と発症後のそれぞれにおいて体組成計測データが得られていた症例において、作成したアルゴリズムを適応し、体組成計測と血清miRNA測定値からの予想が実際の病理組織結果と一致しているかを検証し、アルゴリズムの診断精度を検証する予定です。
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| Causes of Carryover |
当該年度に予定していた解析症例の内で、マイクロRNA測定を行うだけの血清検体量が不足している症例が多数発生しました。検体処理の効率化を行ったがやはり検体量が不足する症例が多数残ったため、新たに症例を集積する必要が発生しました。折しも新型コロナウイルス問題により当施設の診療体制においても通常の診療患者数が前年度までより減少したため追加症例の集積に遅れが生じ、目標としていた症例数を下回ってしまいました。これに伴い当該年度の解析検体数が予定より減少し、マイクロＲＮＡ解析実験に必要な物品購入が予定の約半分程度次年度へ持ち越しとなりました。また研究進行の遅れにより当初予定していた専門学会での研究成果報告も次年度に持ち越しとなりました。以上の経過により次年度使用額が発生したものです。
今年度は5月末までに上記の追加症例の検体が揃う予定であり、その後速やかに必要物品を購入し前年度から持ち越しのマイクロＲＮＡ解析を完了し研究計画の遅れを取り戻し、研究成果も学会等に演題登録、参加発表する予定です。
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Research Products
(4 results)
