2020 Fiscal Year Research-status Report
| Project/Area Number |
20K11612
|
|---|
| Research Institution | Teikyo University |
|---|
Principal Investigator |
松村 暢子 帝京大学, 医学部, 助教 (30317698)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青山 晃治 帝京大学, 医学部, 教授 (00420943)
木下 千智 帝京大学, 医学部, 助教 (10567085)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 尿酸 / プリン体 / 骨髄幹細胞 / グルタチオン / トランスポーター |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
尿酸は骨髄幹細胞などの成体幹細胞に対して骨細胞や神経細胞への分化を促進するという報告があるが、そのメカニズムはまだ明らかになっていない。本研究では、プリン体の最終代謝物である尿酸の成体幹細胞への作用を明らかにする。尿酸は海馬スライス培養においてシステインの取り込みを上昇させ、神経細胞においてグルタチオンの産生を増加させる作用をもつことから、骨髄幹細胞において尿酸がグルタチオン産生を促進するかどうかに焦点を当てる。本年度は、マウス骨髄幹細胞の初代培養におけるシステイン取り込みおよびグルタチオン産生への尿酸の影響を評価した。マウス大腿骨より骨髄細胞を採取し、初代培養骨髄幹細胞を得た。骨髄幹細胞を尿酸0, 1, 10 microMを含む培養液中で30分インキュベートし、さらに培養液中にシステイン100 microMを添加して30分後の細胞内のシステイン量およびグルタチオン産生量、細胞外のシステインの減少量を評価した。評価方法として、システインおよびグルタチオンをABD-Fで蛍光標識し、HPLCを用いて定量分析を行う方法と、培養細胞内のグルタチオンをCMFDA蛍光標識により可視化し、蛍光顕微鏡で観察する方法を用いた。その実験過程で、初代培養の骨髄幹細胞を扱う上で性質の異なる複数の細胞集団が共存することを考慮して評価する必要があることが分かった。そこで骨髄幹細胞における尿酸の作用を正確に評価する新たな方法として、フローサイトメトリーを用いて骨髄幹細胞マーカーを発現する細胞を分別し、さらにシステイン取り込みに関与するトランスポーターの膜発現量で分別した細胞集団において、細胞内グルタチオン産生の変動を評価する測定系を確立した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
初代培養細胞には性質の異なる複数の細胞集団が共存しており、その違いを考慮に入れて尿酸の作用を評価する必要が生じた。そのため新たな解析方法としてフローサイトメトリーを用いて細胞集団を分別評価できる測定系を確立した。
|
| Strategy for Future Research Activity |
フローサイトメトリーを用いて、初代培養骨髄幹細胞の異なる細胞集団ごとに尿酸の作用を評価する。尿酸が特異的な細胞集団について作用を及ぼす場合は、フローサイトメトリーのセルソーティング機能を用いて目的の細胞集団を分取し、骨髄幹細胞における尿酸の作用点、骨髄幹細胞機能に対する尿酸の影響について調べる。
|
| Causes of Carryover |
当年度に行う計画のmicroRNAの定量解析が継続中であり、これに必要な耗品が未購入のため次年度使用額が生じた。
|
