傷害特異的糖鎖修飾に着目した新規糸球体傷害マーカーの開発

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K16197
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 岩崎 剛史 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (60838366)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 慢性腎臓病 / ポドサイト

Outline of Annual Research Achievements

申請者はネフローゼ動物モデルの糸球体を 単離し、RNA-seqによる遺伝子プロファイル解析で発現の変化を認めた遺伝子の中で、タンパクの糖鎖修飾に関わる複数の遺伝子の発現が変化していることに着目した。特にガラクトースにシアル酸を付加する St6galnacファミリーの発現誘導が顕著であり、他にもNアセチルグルコサミン(GlcNac)や Nアセチルガラストサミン(GalNac)にガラクトースを付加するB3galtファミリーなども発現 が上昇していた。このことから傷害を受けたポドサイトでは細胞表面や分泌される蛋白の糖鎖修飾が変化しており、その糖鎖修飾の変化を検出することが、糸球体傷害のマ ーカーとして臨床に役立てることができるのではないかと考えた。
当初はネフローゼ動物モデルと健常対照群の単離糸球体全体の糖鎖プロファイルを質量分析で解析する予定にしていたが、St6galnacファミリ ーによる典型的な糖鎖とされるSialyl-Tn antigenがネフローゼ動物モデル の傷害糸球体に出現することが市販のモノクローナル抗体を使用した免疫染色で確認されたことから、単離糸球体からSialyl-Tn antigenをターゲットとした免疫沈降によって精製された蛋白の糖鎖修飾を解析する方が、より傷害特異的糖鎖修飾を検出する確率が高いと考えられ、免疫沈降の条件検討を行ったが、市販の抗体の特異性に問題があり、見合わせることとした。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

Sialyl-Tn antigenがネフローゼ動物モデル の傷害糸球体に出現することが市販のモノクローナル抗体を使用した免疫染色で確認されたことから、単離糸球体からSialyl-Tn antigenをターゲットとした免疫沈降によって精製された蛋白の糖鎖修飾を解析する方が、より傷害特異的糖鎖修飾を検出する確率が高いと考えられた。
そこで免疫沈降の至適条件を検討するため、Sialyl-Tn antigenを認識する市販の複数の抗体を用いて、ネフローゼ動物モデルの免疫染色で糸球体が染色陽性となるか検討した。ところが最初に用いた抗体以外のモノクローナル抗体ではネフローゼ動物モデルの糸球体は染色陰性であった。更に最初に用いたモノクローナル抗体の新しいロットでも最初のロットで認めていた染色像が再現されなかった。これらの経過よりSialyl-Tn antigenをターゲットとした免疫沈降の計画は見合わせることとした。

Strategy for Future Research Activity

当初の計画に戻り、ポドサイト傷害特異的な糖鎖修飾を糸球体傷害マーカーの候補として選別する。そしてその糖鎖修飾に対するモノクローナル抗体を作成し、最終的には非侵襲的な尿検査でポドサイト傷害特異的糖鎖修飾を検出するELISA系を立ち上げることを目指す。

Causes of Carryover

当初予定していた障害ポドサイト特異的な糖鎖修飾を検出する質量分析や、臨床応用を目指してポドサイト障害特異的な糖鎖修飾を認識する抗体を作成する計画が延期されたため、次年度使用額が発生した。
今後、実施を延期した抗体作成などに予算を使用する予定である。