2021 Fiscal Year Annual Research Report
炎症性シグナルによる細胞極性制御因子を介した肝臓修復機構の解明
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20K16219
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
石橋 理基 京都大学, ウイルス・再生医科学研究所, 助教 (20778279)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | Inscuteable / 肝障害 / 細胞極性 / ゲノム編集 / 遺伝子ターゲッティング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
四塩化炭素投与による肝障害・再生時におけるNF-kBファミリー転写因子c-Rel、および細胞極性制御因子Inscutebale (mInsc) の遺伝子発現量の変化を経時的に確認したところ、それらの発現量に有意な変化は認められなかった。また、c-Rel BSΔマウスおよびmInsc KOマウスにおける肝障害、修復、および肝細胞における脂肪滴蓄積の程度について野生型マウスとの比較を行ったが有意な変化は認められなかった。加えて、mInscの相互作用因子として知られている細胞極性因子Par-3、および肝細胞の細胞極性規定因子DPPIVの局在についても解析を実施したが有意な差は認められなかった。
マウス生体肝臓におけるmInscの局在、および相互作用因子を明らかにすることを目指し、mInsc遺伝子座の開始コドン直上に3xFlag-EGFP配列をノックインした3xFlag-EGFP-mInsc KIマウスの作出を試みた。本マウス樹立のために、CRISPR-Cas9システムによる効率的なKI個体作出技術として、人工合成CRISPR-Cas9切断配列をマルチクローニングサイトの両端に搭載した高汎用型ドナープラスミド pCriMGET(plasmid of synthetic CRISPR coded RNA sequence-equipped donor plasmid mediated gene targeting) システムを開発した。F0世代を獲得したのち、さらに野生型マウスとの交配を行い得られた産仔（F1世代）にて挿入した3xFlag-EGFPカセットが次世代に遺伝することを確認した。さらに、生体肝臓におけるmInscの発現局在を蛍光免疫染色法により抗Flag抗体および抗EGFP抗体を用いて検出することを試みた。
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Research Products
(2 results)
