2020 Fiscal Year Research-status Report
抗がん剤抵抗性細胞群のシングルセル解析による休止型大腸がん幹細胞の同定
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20K16230
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| Research Institution | National Cancer Center Japan |
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Principal Investigator |
神田 裕介 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 特任研究員(シニア・リサーチフェロー) (80803949)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 休止型がん幹細胞 / 抗がん剤抵抗性 / シングルセル解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、がん細胞は不均一な集団であり、がん細胞全体のわずか数％程度の細胞群が抗がん剤抵抗性を持つ事が明らかになってきている。特に、この難治性を規定する少数の細胞群は細胞周期を休止した幹細胞性を持つ事が血液がんで報告されている。一方、大腸がんを含むほとんどの固形がんでは、休止型がん幹細胞の存在とその発現プロファイルは明らかになっておらず、抗がん剤抵抗性を克服する上で休止型がん幹細胞の詳細な解析は必要不可欠である。そこで、大腸がんにおける休止型がん幹細胞の存在と治療抵抗性への役割を解明する目的で、ドキシサイクリンによりヒストン2B(H2B)-EGFP融合タンパクが誘導される大腸がん患者由来オルガノイド培養系を構築した。H2B-EGFPを一過的に発現させると、分裂毎にH2B-EGFPが希釈され蛍光強度が低下するため、長期間培養しても分裂回数の少ないH2B-EGFPラベル保持細胞は休止型がん細胞と同定できる。これまでに、このオルガノイド培養系を用いて、H2B-EGFP高発現細胞は低発現細胞よりもIrinotecanに対して高い抵抗性を示す事を見出してきた。今年度は、このオルガノイドからH2B-EGFP高発現/低発現細胞をFACSにより単一細胞を回収した後にシングルセルqPCR解析を実施した。その結果、H2B-EGFPを高発現する細胞群の中から、大腸のがん幹細胞マーカーのLGR5を発現する抗がん剤抵抗性の休止型がん幹細胞を同定した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
シングルセル解析により休止型がん幹細胞を同定する事ができたため、概ね順調であると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は、当初の研究実施計画に従い、別の抗がん剤を添加した際のシングルセル解析を行うとともに抗がん剤抵抗性を担う遺伝子の絞り込みを行う予定である。
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| Causes of Carryover |
消耗品を予定額より安価に購入できたため次年度使用額が生じた。次年度使用額と翌年度分の助成金を合わせて消耗品費等に使用する。
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[Journal Article] Slow-cycling cancer stem cells regulate progression and chemoresistance in colon cancer2020
Author(s)
Daisuke Shiokawa, Hiroaki Sakai, Hirokazu Ohata, Toshiaki Miyazaki, Yusuke Kanda, Shigeki Sekine, Daichi Narushima, Masahito Hosokawa, Mamoru Kato, Yutaka Suzuki, Haruko Takeyama, Hideki Kambara, Hitoshi Nakagama, Koji Okamoto
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Journal Title
Cancer Research
Volume: 80
Pages: 4451-4464
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Loss of the cystine/glutamate antiporter in melanoma abrogates tumor metastasis and markedly increases survival rates of mice2020
Author(s)
Mami Sato, Kunishige Onuma, Mio Domon, Shun Hasegawa, Ami Suzuki, Ryosuke Kusumi, Remi Hino, Nahoko Kakihara, Yusuke Kanda, Mitsuhiko Osaki, Junichi Hamada, Shiro Bannai, Regina Feederle, Katalin Buday, Jose Pedro Friedmann Angeli, Bettina Proneth, Marcus Conrad, Futoshi Okada, Hideyo Sato
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Journal Title
International Journal of Cancer
Volume: 147
Pages: 3224-3235
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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