2021 Fiscal Year Research-status Report
抗がん剤抵抗性細胞群のシングルセル解析による休止型大腸がん幹細胞の同定
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20K16230
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| Research Institution | National Cancer Center Japan |
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Principal Investigator |
神田 裕介 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 特任研究員(シニア・リサーチフェロー) (80803949)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 休止型がん幹細胞 / 抗がん剤抵抗性 / シングルセル解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年の研究より、がん細胞全体の数％程度に過ぎない細胞集団が抗がん剤治療後の再発の要因となる事が明らかになりつつある。このような難治性を規定する細胞集団は、細胞周期が休止あるいはその進行が著しく遅いがん幹細胞である事が、血液がんを中心に報告されてきた。一方、大腸がんにおいては、上記のような休止型がん幹細胞の存在の有無ならびにその発現プロファイルは不明のままである。休止型大腸がん幹細胞の詳細な解析は抗がん剤抵抗性を克服する治療法開発に繋がるが、これまでその解析手法が確立されていなかった。そこで、休止型大腸がん幹細胞の存在を証明する事を目的として、ドキシサイクリン添加時にのみヒストン2B(H2B)-EGFP融合タンパクが発現誘導される大腸がん患者由来オルガノイド培養系を構築した。本系では、一定期間のみドキシサイクリン添加によりH2B-EGFPを発現誘導させる。ドキシサイクリン除去後は、細胞分裂毎に1細胞当たりのH2B-EGFPタンパク量が倍々に希釈される。そのため、長期間培養後もH2B-EGFPラベル保持細胞は増殖活性の乏しい休止型がん細胞と同定できる。昨年度までに、本系を用いた解析によって、大腸がん治療に用いられるイリノテカンを処理してもH2B-EGFP高発現細胞が残存する事を見出してきた。さらに、イリノテカン処理/未処理のオルガノイドから回収されたH2B-EGFP高発現/低発現細胞のシングルセルqPCR解析の結果、イリノテカン処理後も残存したH2B-EGFP高発現細胞は、大腸のがん幹細胞マーカーLGR5を発現する事が明らかになった。本年度では抗がん剤抵抗性を担う遺伝子をノックアウトする実験系を構築した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
遺伝子ノックアウトの実験系を構築できたため、概ね順調であると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、当初の研究実施計画に従い、抗がん剤抵抗性を担う遺伝子を同定する予定である。
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| Causes of Carryover |
消耗品等の実際の購入額が予定額が下回ったため、次年度使用額が生じた。次年度使用額は消耗品費等に使用する。
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[Journal Article] NF-κB suppression synergizes with E7386, an inhibitor of CBP/β-catenin interaction, to block proliferation of patient-derived colon cancer spheroids2022
Author(s)
Yusuke Kanda, Hirokazu Ohata, Toshiaki Miyazaki, Hiroaki Sakai, Yutaro Mori, Daisuke Shiokawa, Akira Yokoi, Takashi Owa, Atsushi Ochiai, Koji Okamoto
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Journal Title
Biochemical and Biophysical Research Communications
Volume: 586
Pages: 93-99
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Integrative analyses of gene expression and chemosensitivity of patient-derived ovarian cancer spheroids link G6PD-driven redox metabolism to cisplatin chemoresistance2021
Author(s)
Kaoru Yamawaki, Yutaro Mori, Hiroaki Sakai, Yusuke Kanda, Daisuke Shiokawa, Haruka Ueda, Tatsuya Ishiguro, Kosuke Yoshihara, Kazunori Nagasaka, Takashi Onda, Tomoyasu Kato, Tadashi Kondo, Takayuki Enomoto, Koji Okamoto
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Journal Title
Cancer Letters
Volume: 521
Pages: 29-38
DOI
Peer Reviewed
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