2022 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of transport mechanism of hemagglutinin of botulinum toxin complex to adherens junctions
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20K16240
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
阿松 翔 金沢大学, 医学系, 助教 (90827346)
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2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | ボツリヌス毒素 / ヘマグルチニン / 細胞外輸送経路 / E-cadherin / カドヘリンフロー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、ボツリヌス毒素複合体のヘマグルチニン（HA）が上皮細胞のアドへレンスジャンクション(AJ)に局在するE-cadherinにアクセスするための細胞外輸送経路を解析した。HAは細胞の底部表面に結合した後、側部表面のAJへ移行することを明らかにした。HAのE-cadherin阻害活性はRhoA阻害剤、ROCK阻害剤およびミオシンII阻害剤によって阻害されたことから、HAの細胞外輸送はアクチンフローに依存することが示唆された。また、HAのE-cadherinに結合しない変異体（HA-KA）はAJへ移行しなかった。以上の結果から、HAは、アクチンフローによって運ばれるE-cadherin（カドヘリンフロー）を利用してAJへ移行することが示唆された。HAがカドヘリンフローを利用することを検証するためにE-cadherin-EGFPを発現するMDCK細胞を用いてライブセルイメージングを行った。コンフォーカル顕微鏡にライブセルイメージング培養チャンバーを設置し、蛍光（Alexa568）ラベルしたHAを細胞に添加し観察を行った。しかし、蛍光観察中のEGFPの褪色や底部細胞表面でのE-cadherinの停留により側部表面へのカドヘリンフローを未だ観察できていない。現在、使用している観察環境に適した（より蛍光強度の高い）蛍光タンパク質の変更やよりカドヘリンフローを観察しやすい上皮細胞株の選定などの条件検討を進めている。
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Research Products
(6 results)
