FRETに基づくトシリズマブの新規HPLC法の開発と薬物相互作用解明への応用

2023 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20K16530
• Research Institution: Tokyo University of Science, Yamaguchi
• Principal Investigator: 高田 誠 山陽小野田市立山口東京理科大学, 薬学部, 助教 (60551348)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: 抗体医薬品 / 選択的沈殿法 / HPLC / トシリズマブ / インフリキシマブ / 自然蛍光検出

Outline of Annual Research Achievements

モノクローナル抗体を主成分とした抗体医薬品は世界的に高い売り上げ医薬品であり、バイオシミラーも次々に開発され、今後も臨床現場における利用が増えると予想される。それに伴い、抗体医薬品の薬理効果の確認を目的とした血中薬物濃度測定についても必要性が高まっている。現在、抗体医薬品の測定には選択性の高いELISAなどの酵素免疫測定法や酵素消化を伴うLC-MS/MS法が用いられている。しかしこれらの方法は、前処理操作が煩雑で分析完了までに時間がかかるといった問題点を有している。これらの理由から、直接血中濃度を測定することはほとんど行われていない。そこで私は、抗原－抗体反応を用いない物理化学的手法によりヒト化抗体医薬品であるトシリズマブ（TCZ）とサブクラスのIgG1を分離する前処理法の開発を進めてきた。その結果、ヒト血清中のTCZを選択的沈殿法による前処理後にHPLCを用いてTCZの自然蛍光を検出することで極めて迅速かつ簡便に定量する分析法を開発した。また、選択的沈殿法はヒト化抗体であるTCZへの適用が可能であったことから、マウス由来のアミノ酸比率の異なるキメラ型抗体やヒト型抗体に対しても有用であることが期待された。一方で、バイオシミラーは先発抗体医薬品との比較において品質、安全性、および有効性については「同等性／同質性」が求められているものの、分子量が大きいため品質特性については同等でない可能性がある。これらの製剤の品質管理や生体中医薬品分析は極めて有用であることから、同じIgG1サブクラスでありキメラ型抗体医薬品のインフリキシマブ（IFX）へと本法を適用した。まず、先発品をモデル医薬品として使用して分析法を開発し、バリデーション評価を行った。更に、現在上市されているIFXバイオシミラーについても検討を行い、本法のバイオシミラーに対する応用性についても確認した。