2020 Fiscal Year Research-status Report
Usefulness of CRISPLD2 protein for neonatal chronic lung disease
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20K16857
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
柴田 直昭 島根大学, 医学部, 特別協力研究員 (60633138)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | CRISPLD2 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
新生児慢性肺疾患（CLD）は、早産児が、肺の未熟性、炎症、酸素毒性などの複数の要因で発症する疾患である。確立した治療法がないため、現在でも致死率や合併症率が高く、有効性と安全性を兼ね備えた治療法の開発が必要である。そこで、我々は肺の形成と抗炎症作用の両方に効果を発揮するが、高濃度酸素状態で産生が低下するCRISPLD2タンパクを用いてCLDへの有効性だけでなく、作用機序と適切な投与方法も明らかにする。本研究戦略は、ヒトへの臨床応用を行い、CRISPLD2がCLDの標準的治療を目指すとともに、CLD以外の難治性肺疾患への適応拡大にもつなげることで、難治性肺疾患の新規治療薬の開発につなげることが目標である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CRISPLD2の全長のcDNAを作成した後、pcDNA Vectorに搭載した。このVectorを293T細胞に導入して、培養上清中のCRISPLD2タンパクを精製した。
次に、リポサッカロイド（LPS）で3つの気管支・肺組織の細胞株（A549, Calu3, MRC5）に投与して炎症性サイトカインが上昇することを確認した。その後、CRISPLD2タンパクを投与して、抗炎症作用をデキサメサゾンと比較して検討した。その結果、デキサメサゾン（DEX）では明らかに炎症性サイトカインが低下するが、CRISPLD2タンパクでは抗炎症作用を認めなかった。そのため、現在、CRISPLD2タンパクの投与量やCRISPLD2高発現細胞株を用いて、抗炎症効果を確認している。
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| Strategy for Future Research Activity |
CRISPLD2の投与方法などを変更して、抗炎症作用、繊維化抑制能、抗酸化作用および肺組織の再生能（遺伝子発現、Western blotting、免疫染色）、遊走能（ボイデンデンチャンバーアッセイ）を評価する。繊維化抑制能、抗酸化作用および肺組織の再生能（遺伝子発現、Western blotting、免疫染色）、遊走能（ボイデンデンチャンバーアッセイ）を評価する。
新生児ラットをLPSで刺激後にCLDモデルラットを作製する。CRISPLD2を投与後、生存率と体重を検討する。また、肺組織の形態を平均肺胞径、HE染色などを測定して肺形態を評価する。さらに、免疫染色により、肺の繊維化、アポトーシス、肺胞上皮の再生などを検討する。
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| Causes of Carryover |
細胞株の購入経費が予定より安価に購入できたことにより、次年度の使用額が生じた。この費用は次年度に行う消耗品に使用する予定である。
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