2020 Fiscal Year Research-status Report
胆汁中細胞外小胞における分離法の確立と胆道癌診断の新規バイオマーカーの探索
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20K16977
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
池田 千咲 山形大学, 医学部, 客員研究員 (60795706)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 細胞外小胞 / 胆管癌 / ヒト胆汁 / バイオマーカー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
胆管癌は予後不良な難治性癌であるが、病理学的診断困難例が多く存在する。細胞外小胞(EV)は様々な細胞から分泌されており、癌の新規バイオマーカーとして注目されている。
胆汁中EVには胆道疾患に特異性が高いバイオマーカーが存在し、癌の早期発見に寄与するではないかと考えた。そこで胆管癌における胆汁中EVを用いた新規バイオマーカーの探索を行った。
①より安定した実験結果を得るために、これまで体液中EVにおいて課題とされてきた高純度のEV分離を可能にする方法を検討した。胆汁中からの高純度EV分離法を確立した。
超遠心法にて分離し、透過型電子顕微鏡や蛍光定量法、Nanosight、Western blotなどにより典型的なEV採取が可能であることを確認した。またmicroRNAや夾雑物蛋白質を比較し、純度の比較を行った。
②胆管癌と胆管結石症において、胆汁中EV内の蛋白質を液体クロマトグラフィーで抽出しラベルフリー定量にて比較した。プロテオミクス結果を用いて、2群間においてより検出感度が強度で有意差をもった蛋白質を、胆管癌診断に有用な候補蛋白質とした。
③候補蛋白質における胆管癌診断マーカーとしての有用性を検討している。ELISA kitを用いて比較する。また癌組織の免疫染色にて蛋白質の発現を確認する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
症例を収集し胆汁中EVを分離した。EV内の蛋白質を抽出し、プロテオミクス解析を行っており、おおむね予定通り研究は進捗している。
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| Strategy for Future Research Activity |
プロテオミクス解析の結果より診断マーカーとなりうると考えられた候補蛋白質において、新たに検証コホートを作成し胆管癌における診断能を検討していく。より臨床に即した測定法が望ましいと思われ、市販のELISA kitを用いて測定する。また候補蛋白質が実際に組織内でどのように発現しているか免疫染色、スコアリングにて検討していく。
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| Causes of Carryover |
COVID-19の感染拡大に伴い、各学会がWeb開催となり旅費が不要となったため、次年度へ繰り越しとなりました。
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Research Products
(2 results)
