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2020 Fiscal Year Research-status Report

MET糖鎖による肺がん細胞増殖シグナル抑制メカニズムの解析

Research Project

Project/Area Number 20K17218
Research InstitutionSapporo Medical University

Principal Investigator

齋藤 淳  札幌医科大学, 医学部, 研究員 (90836446)

Project Period (FY) 2020-04-01 – 2022-03-31
KeywordsMET / 糖鎖 / 肺癌
Outline of Annual Research Achievements

H1975、EBC-1肺がん細胞株および外因性MET発現CHO-K1細胞を糖鎖阻害剤(ツニカマイシン・NGI-1)で処理した。Western BlottingでMETのプロセシングおよびトラフィッキングが抑制すされていることを明らかにした。また、METの細胞外ドメインを糖鎖阻害薬で処理することで培養液中への分泌能が低下することを明らかにした。
METの細胞外ドメインを精製し、nano LC-ESI-MS/MS質量分析法を用いて、部位特異的な糖鎖構造を決定した。その結果、METのN型糖鎖はシアル酸とコアフコースが豊富なcomplex型が主流であることがわかった。さらに、N型糖鎖を欠失させた変異体を作製し、METのAsn-399上のN型糖鎖を欠失させると、受容体のリン酸化や二量体化が抑制され、woud-healing areaが低下することを明らかにした。
METのリコンビナント細胞外ドメインをPNGaseFで処理し糖鎖を全て欠失させたものを精製し、表面プラズモン共鳴法でリガンドであるHGFとの結合能を評価した。その結果、糖鎖を全て欠失させてもリガンドとの結合能は変化なかった。
これらのデータは今後のMET研究の基礎となりうる。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初予定していた実験を進めることができている。

Strategy for Future Research Activity

糖鎖欠損変異体を複数種類作成すること、リガンド結合や二量体化に重要とされているSEMAドメインの糖鎖に着目し、SEMAドメイン上の全ての糖鎖を欠損させて場合どうなるか、α鎖・β鎖の糖鎖のみを欠損させた場合どうなるか、今後評価予定である。

  • Research Products

    (2 results)

All 2020

All Presentation (2 results)

  • [Presentation] Analysis of the structures and functions of N-glycans of MET.2020

    • Author(s)
      A. Saitou, M. Takahashi, S. Yokoyama, N. Fujitani, S. Ariki, A. Saito, K. Kuronuma, H. Chiba, H. Takahashi.
    • Organizer
      European Respiratory Society International Congress 2020 virtual.
  • [Presentation] METの部位特異的糖鎖構造の解析.2020

    • Author(s)
      齋藤淳,横山早織,藤谷直樹,齋藤充史,有木茂,千葉弘文,高橋弘毅,高橋素子.
    • Organizer
      第60回日本呼吸器学会学術講演会.

URL: 

Published: 2021-12-27  

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