2021 Fiscal Year Annual Research Report
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20K17222
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| Research Institution | Jichi Medical University |
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Principal Investigator |
水品 佳子 自治医科大学, 医学部, 講師 (70458321)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 炎症 / 細胞死 / 細胞・組織 / 肺疾患 / 免疫学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度に引き続き、特発性肺線維症（IPF）急性増悪におけるpyroptosisの関与に着目し、ナノシリカによる急性肺傷害（ALI）モデルを用いた解析を進めた。肺胞上皮細胞株であるA549細胞にナノシリカを添加するとCaspase-8の活性化およびGSDMEのN末端の切断が認められた。Caspase阻害剤であるEmricasanの添加によって、Caspase-8の活性化は抑制され、GSDMEの切断も有意に抑制された。一方でEmricasanを添加しても、LDHの増加は抑制されず、SYTOX Green（SYTOXG）staining assayでも、有意な細胞死の抑制は認められなかった。Caspase-3およびCaspase-8を各々欠損させたA549細胞を作製し、同様の解析を行ったが、Caspase-3およびCaspase-8欠損A549細胞でもナノシリカ添加による細胞死は抑制されなかった。以上の結果からナノシリカによる肺胞上皮細胞の細胞死にpyroptosis以外の細胞死が関与していることが示唆された。ナノシリカを添加するとA549細胞においてMLKL（Mixed lineage kinase domain-like）のリン酸化が認められた。MLKLはRIP3およびRIP1とともにnecrosomeというタンパク質複合体を形成し、necrosome内でMLKLはRIP3によってリン酸化されnecroptosisを誘導する。そこでナノシリカによる肺胞上皮細胞の細胞死に、necroptosisが関与している可能性を考えた。RIP3阻害剤であるGSK’872を添加するとSYTOXG staining assayでナノシリカによるA549細胞の細胞死が抑制された。以上の結果から、ナノシリカによるA549細胞の細胞死にnecroptosisが関与していることが示された。
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