2022 Fiscal Year Research-status Report
アトピー性皮膚炎および乾癬の皮膚バリア機能改善に対するヒアルロン酸オリゴ糖の効果
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20K17327
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| Research Institution | Josai University |
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Principal Investigator |
鹿毛 まどか 城西大学, 薬学部, 助教 (40776324)
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2021-02-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 皮膚バリア機能 / アトピー性皮膚炎 / 乾癬 / ヒアルロン酸オリゴ糖 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本課題では四糖ヒアルロン酸オリゴ糖（HA4）の皮膚疾患に対する有効性を評価している。当該年度は、HA4の病態モデルマウスへの皮膚適用における皮膚バリア機能およびそのメカニズムを評価した。
4週齢HR-1へアレスマウスにHR-ADを給餌させることでアトピー性皮膚炎様症状誘発マウスを作製した。HR-AD食の給餌と共にHA4塗布を開始し、経時的に背部皮膚の経表皮水分蒸散量（TEWL）、角層水分量および皮膚表面pHを測定した。その結果、HR-AD食餌に伴いTEWLの増加、角層水分量の低下および皮膚表面pHの上昇が確認されたが、HA4塗布により角層水分量の低下抑制、TEWLの上昇抑制傾向、pHの上昇抑制、表皮厚の軽減が示された。
乾癬モデルマウスはイミキモド（IMQ）を塗布することで作製した。C57BL/6NCrマウスを除毛してから3日後よりIMQおよびHA4を、1日1回、6日間繰り返し塗布した。塗布期間中毎日、TEWLおよび角層水分量を測定し、塗布開始後6日目に皮膚を採取し、ヘマトキシリン・エオシン染色による皮膚形態の観察および表皮厚を測定した。その結果、Normal群（未処理群）と比較してIMQ塗布により塗布開始1日後よりTEWLの上昇および角層水分量の低下が見出され始め、塗布に伴い悪化した。しかし、HA4塗布によりControl群（溶媒塗布群）と比べてTEWLの上昇の遅延と表皮肥厚の軽減が認められた。この差は塗布6日目にはほぼ消失した。これらの結果より、HA4は乾癬の角層機能の悪化を遅延させる効果があることが示唆された。今後はHA4による遅延メカニズムの解明を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
方法の最適化の検討に時間を要した。
動物による評価はおおむね順調に進んでいるが、細胞におけるメカニズム解明の評価が、条件検討に時間がかかっている。
育児の関係で研究時間が限られているなか、子供の月齢があがり体調も落ち着いてきたので、家族の協力のもと研究時間を確保していきたい。
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| Strategy for Future Research Activity |
アトピー性皮膚炎様症状誘発マウスでは、角層水分量の低下抑制が顕著にみられたため、水分保持に関与するセラミド産生、天然保湿因子産生やフィラグリン産生に及ぼす影響を評価する。また、表皮厚が軽減していたことから、免疫組織化学染色やウエスタンブロットにより表皮細胞分化度を評価する。さらに、、アトピー性皮膚炎マーカー(インターフェロ
ン(IFN) -γなど) を免疫組織染色法により染色し、in vitroでのバリア機能および炎症反応を評価する予定である。
乾癬モデルマウスでは、TEWLの悪化遅延のメカニズム解明のため、ケラチノサイトの分化移行の評価や、乾癬マーカー(インターロイキン(IL) -17aなど) をELISA、Real-time PCR、免疫組織染色法により評価する。
また、正常ヒト表皮ケラチノサイトにおけるHA4の炎症反応に及ぼす影響を評価する。培養系におけるケラチノサイトでのアトピー様炎症にはTNF-α/IFN-γを添加することで、乾癬様炎症にはM5（IL-17A, TNF-α, IL-1α, IL-22, Oncostatin M）を添加することで炎症を惹起させ、HA4の炎症反応に及ぼす影響を様々な遺伝子発現およびタンパク質量で評価する。
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| Causes of Carryover |
動物実験は順調に進んだが、細胞における評価の条件検討に時間がかかり、思うように研究が進まなかったため。
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