Adaptation of therapeutic agents for Th1 cell dependent severe asthma using asthmatic murine model

2023 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20K17436
• Research Institution: Clinical Research Center for Allergy and Rheumatology, National Hospital Organization, Sagamihara National Hospital
• Principal Investigator: 神山 智 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 研究員 (20626783)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: T細胞 / アレルギー反応 / 気管支喘息

Outline of Annual Research Achievements

コラーゲンゲル包埋気管支平滑筋細胞を用いた収縮アッセイには、ヒト由来気管支平滑筋細胞を用いている。細胞はその由来組織の通り入手性に難があり、かつ特定条件の細胞株を指定して継続的に入手することが難しいため、複数の細胞株より大量増殖ストックの作成保存と収縮アッセイ時の性能評価を行った。4つの販売ロットを基にそれぞれ培養増殖し、増殖活性が高く、継代数が増えても安定する細胞を大量培養して株化した。ゲル収縮アッセイにおいて十分な収縮活性を持ち、かつ収縮因子非存在下のコントロール群が明瞭となる性質の細胞株を選別した。
また、前年に引き続き、ステロイド抵抗性クローンの選抜を行うとともに、培養上清のELISA法によるサイトカイン産生の測定およびコラーゲン包埋気管支平滑筋細胞の収縮アッセイを行った。
一方で、ステロイド感受性から選抜した抵抗性系統が、長期の継代培養の継続とともにステロイド抵抗性を維持しないケースが確認された。これは、geneticな変異というよりは特定のシグナル因子による限定的なステロイド抵抗性の発現あるいはエピジェネティクスが示唆される。
また、通常IFN-γを産生するクローンがIL-4, IL-5,IL-13を産生するケースと、IL-4, IL-5,IL-13を主に産生するクローンにおいてIFN-γが確認されたケースがあった。しかし今回選抜したクローンの中にはTh1/Th2再分化の確定的証拠は得られなかった。Th1クローンは4系統全てに喘息反応の惹起が確認されている一方で、実験に供したTh2クローンの中に、動物モデルにおいて重篤な好酸球浸潤を誘発するものは複数確認されたが、呼吸機能の指標から即時型および遅発型喘息が確認されたクローンは無かった。クローン内におけるTh1/Th2サイトカインのアンバランスが細胞浸潤や呼吸機能にどのように影響するかは今後の課題である。

Research Products

• [Presentation] Biochemical analysis of T cell dependent bronchoconstriction (2023)
  • Author(s): Kouyama S, Ohtomo-Abe A, Tawasaki Y, Iwata M, Nakamura Y, Hamada Y, Kamide Y, Sekiya K, Fukutomi Y, Ohtomo T, Kaminuma O, Mori A
  • Organizer: American Academy of Allergy Asthma & Immunology Annual Meeting 2023
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Biochemical characterization of T cell derived bronchoconstrictor (2023)
  • Author(s): Kouyama S, Ohtomo-Abe A, Kawasai Y, Iwata M, Nakamura Y, Hamada Y, Kamide Y, Sekiya K, Fukutomi Y, Ohtomo T, Kaminuma O, Mori A
  • Organizer: European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2023
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Biological and biochemical analysis of T cell derived bronchoconstriction (2023)
  • Author(s): Kouyama S, Ohtomo-Abe A, Kawasaki Y, Iwata M, Nakamura Y, Hamada Y, Kamide Y, Sekiya K, Fukutomi Y, Ohtomo T, Kaminuma O, Mori A
  • Organizer: European Respiratory Society 2023 International Congress
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Cellular Analysis of T cell-dependent steroid-resistant asthma (2023)
  • Author(s): Kouyama S, Ohtomo-Abe A, Kawasaki Y, Nakamura Y, Kamide Y, Sekiya K, Ohtomo T, Kaminuma O, Mori A
  • Organizer: Asia Pacific Association of Allergy, Asthma and Clinical Immunology International Conference 2023
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Cellular and molecular analysis of T cell-dependent steroid-resistant asthma model (2023)
  • Author(s): Kouyama S, Ohtomo-Abe A, Kawasaki Y, Nakamura Y, Hamada Y, Kamide Y, Sekiya K, Fukutomi Y, Ohtomo T, Kaminuma O, Mori A
  • Organizer: Asia Pacific Society of Respirology 2023 International Congress
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Pharmacological characterization of T cell-induced bronchoconstriction (2023)
  • Author(s): Kouyama S, Ohtomo-Abe A, Kawasai Y, Iwata M, Nakamura Y, Kamide Y, Sekiya K, Fukutomi Y, Ohtomo T, Kaminuma, O, Mori A
  • Organizer: World Allergy Congress 2023
  • Int'l Joint Research