誘導ヒトシュワン様細胞移植を用いた難治性神経障害性痛に対する根治的治療法の開発

2022 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20K17826
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 村上 徹 東北大学, 大学病院, 助教 (90756248)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 神経障害性痛

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目標は難治性の末梢性神経障害性痛に対する細胞移植治療法の開発である。以前、我々の研究グループで開発した神経障害性痛の動物モデルである、坐骨神経圧迫損傷モデルラットを作成し無作為に3群に分け、それぞれヒト線維芽細胞から誘導した誘導シュワン細胞、ラットシュワン細胞、細胞移植を行わない群とし、行動評価(von frey試験およびHargreaves試験)及び免疫組織学的評価を行った。坐骨神経圧迫損傷を受けたすべてのラットは1~2週間後に機械的アロディニア及び熱性痛覚過敏を認めたが、誘導シュワン細胞およびラットシュワン細胞を投与した群では、細胞移植を行わなかった群と比較し、損傷6週間後にいずれも改善傾向であった。現在のところ個体数が少ないため、統計学的評価の施行は難しい。 今後の研究としては投与した細胞の動態、いずれの組織に生着し、神経再生に関わるサイトカインのmRNAやタンパクの発現上昇が認められるかの確認が必要である。そのために、投与細胞を蛍光タンパクでラベルする必要があった。本研究ではレンチウイルスの系を用いて投与細胞にAcGFPを導入した。まず市販より購入したpLVSIN-EF1α-AcGFP1-C1 Vectorを大腸菌DH5αに トランスフォーメーションし、大量培養、精製し、実験に使用するプラスミドを調整した。その後293T細胞にパッケージングプラスミドと共にコトランスフェクション、48時間後に回収。その後凍結融解の有無、ポリブレン添加の有無、様々なウイルス液の希釈倍率によりヒト線維芽細胞に感染させ、最適な条件を検討した。その結果、凍結融解による明らかな力価低下は認められなかった。ポリブレン添加による明らかな細胞障害も求めず、GFP陽性細胞は著明に増加した。ウイルス液:新鮮培地の割合を1:9以上とした場合、ほぼ100%の細胞でGFP陽性となった。