Roles of efferocytosis in intracranial aneurysm rupture

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K17933
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 宮本 健志 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 助教 (80585000)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: 脳動脈瘤 / エフェロサイトーシス / アポトーシス

Outline of Annual Research Achievements

令和2年度は研究環境の整備、動物や試薬、器具等の購入、データの整理、新規実験計画の立案、実行を行った。当初の予想通り、遺伝子操作によるエフェロサイトーシス不全を起こしたマウス(ノックアウトマウス)では有意に脳動脈瘤破裂が増加していた。ノックアウトマウスと野生型のマウスの血圧を比較したところ、2 群間でDOCA誘発性高血圧に有意差はなかった。血圧に関係なく、遺伝子的差異が脳動脈瘤破裂を増加させたと考えられた。エフェロサイトーシス不全は脳動脈瘤破裂を増加させることが示せた。また、ヒトおよび動物でエフェロサイトーシスを同定し、背景にある分子機構を解明する予定である。ヒト脳動脈瘤血管壁を用いて、免疫組織化学染色や免疫蛍光染色を行っている。過去の文献を参考にして、Cleaved Caspase 3、TUNEL染色を行っているが、特異的な反応が得られていない。今後も抗体や染色条件の変更 など、至適条件を検討中である。また、脳動脈瘤動物モデルでノックアウトマウスと野生型のマウスにおいてRT-PCRを行った。脳血管壁において炎症関連分子を比較したところ、ノックアウトマウスでは炎症関連分子が上昇している傾向にあった。他の関連分子やタンパク質、血漿中の関連分子についても解析を続ける予定である。実験計画にある他の遺伝子改変マウスを使った実験や阻害抗体を用いた実験については準備段階にある。初期実験の結果が得られた後に、計画を進めていく予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

血管壁を用いて、免疫組織化学染色や免疫蛍光染色を行っている。過去の文献を参考にして、Cleaved Caspase 3、TUNEL染色を行っているが、特異的反応が得られていない。今後も抗体や染色条件の変更など、至適条件の検討が必要である。脳血管壁において炎症関連分子を比較したところ、ノックアウトマウスでは炎症関連分子が上昇している傾向にあったが、十分な裏付けが得られていない。ELISA等、他の実験手法を用いて検討を進めていく予定である。
遺伝子改変マウスや抗体の入手に時間がかかっている。

Strategy for Future Research Activity

免疫組織化学染色や免疫蛍光染色について、抗体や染色条件など、至適条件を検討していく。動物実験においても、血漿サンプル、血管壁サンプルなど様々な検体から仮説の裏付けが出来るように実験を進めていく。可能であれば、薬物学的にアポトーシスやエフェロサイトーシスを促進あるいは抑制出来るか検討する。

Causes of Carryover

コロナ禍で研究体制が十分に取れず、動物実験が進まなかった。また、学会発表の機会がなく、旅費を使用しなかったため、次年度使用額が生じた。次年度以降の研究体制の整備、物品購入、旅費として使用する予定である。