膠芽腫に対するPD-1抗体とCOX-2阻害薬併用効果の作用機序解明

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K17971
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 山口 泉 徳島大学, 病院, 特任助教 (70780005)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: PD-L1 / CSN5

Outline of Annual Research Achievements

マウスｇｌｉｏｍａ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ（ＧＳＣ）およびヒトｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ（ＧＢＭ）初代培養細胞　ＴＧＢ－００におけるＣＯＸ－２阻害薬（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）添加による殺細胞効果とＰＤ－Ｌ１発現低下作用とそのメカニズムを調べるため培養細胞を３群「①　Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ（３０μＭ）」あるいは「②　Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ（６０μＭ）」あるいは「③　溶媒を培地に添加」に分けて２４時間後にＷＳＴ－８により殺細胞効果を評価した。Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂを投与すると容量依存的にＧＳＣとＴＧＢ－００のｃｅｌｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙを抑制し、それとともにＰＤ－Ｌ１の蛋白発現も有意に低下することが見いだされた。さらにＰＤ－Ｌ１の蛋白発現低下のメカニズムを調べるためにｑＲＴ－ＰＣＲにてＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡレベルを解析した。ＧＳＣではｃｅｌｅｃｏｘｉｂを投与することで、ＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡは逆に有意に増加していた。ＴＧＢ－００においてもｃｅｌｅｃｏｘｉｂを投与することで、ＰＤ－Ｌ１のｍＲＮＡの値は変化していなかった。つまりｃｅｌｅｃｏｘｉｂによるＰＤ－Ｌ１蛋白発現制御は転写レベルを制御するのではないことが分かった。ＰＤ－Ｌ１の転写後の制御に関連する分子としてＣＯＰ９　ｓｉｇｎａｌｏｓｏｍｅ　５　（ＣＳＮ５）が脱ユビキチン化を制御することで引き起こされるとの報告があったため、検討したもののＣｅｌｅｃｏｘｉｂ投与によりＣＳＮ５の蛋白、及びｍＲＮＡの発現レベルには影響を認めなかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究計画に従い、ＣｅｌｅｃｏｘｉｂによるＰＤ－Ｌ１の発現低下作用のメカニズムをマウスｇｌｉｏｍａ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ（ＧＳＣ）およびヒトｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ（ＧＢＭ）初代培養細胞　ＴＧＢ－００を用いた検討を行った。これにより、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいてＰＤ－Ｌ１の蛋白発現低下作用は蛋白合成系ではなく、転写レベル以降のプロセスで制御されていることを示すことができた。

Strategy for Future Research Activity

ＣｅｌｅｃｏｘｉｂによるＰＤ－Ｌ１蛋白発現制御は転写レベル以下を制御することでなされていることが見いだされたので、今後はＰＤ－Ｌ１の転写後の制御に関連する分子を検討し、メカニズムを解析していくことが必要と考えた。ＰＤ－Ｌ１の転写後の制御に関連する分子としてＣＯＰ９　ｓｉｇｎａｌｏｓｏｍｅ　５　（ＣＳＮ５）が脱ユビキチン化を制御することで引き起こされるとの報告が乳癌において報告されている。そのためＣｅｌｅｃｏｘｉｂ投与によりＣＳＮ５の蛋白、及びｍＲＮＡの発現レベルをＧＳＣ、ＴＧＢ－００細胞で検討したものの発現レベルに影響は認められなかった。その他、ＰＤ－Ｌ１の転写後の制御因子としてはＦＫ５０６　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　５（ＦＫＢＰ５）の関連がｇｌｉｏｍａ細胞で報告されている。そのため、今後はＣｅｌｅｃｏｘｉｂを投薬したマウスＧＳＣおよびヒトＧＢＭ初代培養細胞　ＴＧＢ－００に対して、ｃｅｌｅｃｏｘｉｂを投薬し、ＦＫＢＰ５の蛋白、及びｍＲＮＡの発現に影響を及ぼすか検討していく予定である。

Causes of Carryover

（理由）
実験の結果が予測されたものと異なったため、購入物品の変更とその必要期間の変更が生じたため。
（使用計画）
試薬等の物品費として次年度の研究にて使用する。