2022 Fiscal Year Annual Research Report
補体B因子ノックアウトラットを用いた自己免疫反応による前立腺肥大症増殖機構の解明
| Project/Area Number |
20K18120
|
|---|
| Research Institution | Fukushima Medical University |
|---|
Principal Investigator |
秦 淳也 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (00769606)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 前立腺肥大症 / 補体 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
CRISPR/Casシステムを用いて、B因子ノックアウトラット作成を行なった。まず、B因子のガイドRNA(gRNA)を設計した。その設計に基づいたgRNA、Cas発現ベク ターを調製し、続いて作成した発現ベクターをFisher系ラット受精卵にマイクロインジェクションし、これを仮親の卵管へ移植した。目的の変異が起きた産仔の スクリーニングを行い、目的の変異の導入が確認されたものを抽出し、繁殖を進めてB因子単独欠損(-/-)ラットを作成した。スクリーニングには、産仔の耳組織 を用いて、PCRもしくはシークエンスにより行なった。B因子単独欠損(-/-)ラット、野生型ラットに対して、ラット胎仔尿生殖洞を移植することで、前立腺肥大 症モデルラットを作成した。移植3週間後に、肥大前立腺組織を採取して、重量や分子生物学的評価を行なった。その結果、B因子欠損ラットでは、野生型ラット に比較して前立腺重量が有意に減少していたが、欠損ラットでは体重の減少も認められた。さらに、組織学的評価では、特に前立腺間質成分の増殖が抑制されて いた。さらに、Western blottingの結果、補体各成分(C1q, C3, MBL, C5b-9)の発現が、B因子欠損ラットで有意に低下していることがわかった。免疫組織化学染 色では、特にC1q、C3、MBL、C5b-9は間質優位に局在しているが、欠損ラットではC3, C5b-9の発現が低下していた。
|
