妊娠高血圧腎症・不育症に対する新たな治療～ヒトiPS細胞を用いて～

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K18206
• Research Institution: Osaka Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 大門 篤史 大阪医科薬科大学, 医学部, 助教 (20846894)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: iPS細胞 / 流産モデルマウス / 血管新生因子

Outline of Annual Research Achievements

ヒトiPS細胞を既存のプロトコルに従ってEPCに分化させ、その細胞特性の解析を行った。EPCは末梢血中の単核球成分のうち、CD34陽性細胞としてこれまでに多くの論文で特徴付けられており、そのほか造血幹細胞表面抗原のCD133や、血管内皮細胞表面抗原のCD31を発現する。また血球系細胞表面抗原であるCD45は発現しないとされている。まず分化させた細胞をRT-qPCR、FACSで解析し、さらに分化誘導2.5.8日目でその発現量の変化をそれぞれ確認した。RT-qPCRでは分化誘導5日目でCD34の発現量が最も多く、FACSでは分化誘導8日目でCD34陽性細胞の割合が高かった。CD31は日数を経るごとに発現増加する傾向であった。いずれの分化誘導日数においてもCD45の発現は認めず、CD133は日数による有意差は認めなかった。RT-qPCR、FACSの結果より、分化誘導5日目のヒトiPS細胞由来EPCを妊娠6.5-7.5日目の流産モデルマウスに尾静脈投与したところ、流産率はコントロール群で27.1%であったのに対し、細胞投与群では13.6%(P<0.04)と低下を認めた。次に流産率改善の機序を検討するため、胎盤組織の透明化を行い、GFP標識したヒトiPS-EPCs(GFP-EPCs)を投与した。GFP-EPCsによる直接的な血管形成は観察できなかったが、胎盤に細胞が局在していることが確認でき、RT-qPCRでは胎盤において血管新生因子であるVEGF、PlGFの上昇が見られた。ヒトiPS-EPCsは流産モデルマウスにおいて血管新生因子を増加させ、流産率を改善すると考えられる。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

実験が想定よりも時間を要したため、進捗状況はやや送れているが、現在論文作成中で論文投稿を急いでいる。

Strategy for Future Research Activity

現在論文作成中である。
リバイスで追加実験が求められることが予想されるため、マウスの継続飼育やiPS細胞の継代を今後も続けていく。

Causes of Carryover

COVID-19流行による学会に参加が減少したため、旅費としての出費がなかったため。
継代用品などに使用する予定である。