2021 Fiscal Year Research-status Report
Precise regulation of SOX9 expression during gonadal development by the testis specific enhancers using a genetically humanized mouse model
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20K18208
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| Research Institution | National Center for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
辻 敦美 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, システム発生・再生医学研究部, (非)研究員 (40842414)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | エンハンサー / 精巣形成 / SOX9 / SRY |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度、hXYSRaと相互作用する可能性のある転写因子やプロモーター配列において種特異的に作用する可能性が示唆されたため、その抽出された課題について検討を進めた。ヒトSOX9の5’上流領域に存在する遺伝子発現調節領域候補配列(hXYSRa)のエンハンサー活性を確認するため、in vitro reporter assayを実施した。現在複数のレポーターコンストラクトとSOX9、SRY、NR5A1発現ベクターの作用について検討し、本実験に適切なレポーターコンストラクを検討している。今後はhXYSRaを挿入したレポーターコンストラクトで、エンハンサー機能の確定及び各種転写因子との相互作用について確認する予定である。
またマウスSox9のエンハンサーmXYSRaとhXYSRa配列を置換したアリルをホモに有するマウスの性腺においてSox9発現誘導が起きなかったことから、本系統で、human SRYを強制発現させた場合の外性器表現型解析を行うため、マウスSry周辺領域ゲノム配列のトランスジェニックマウス作製を試みた。2回の受精卵に対するマイクロインジェクションで目的マウスが得られたため、今後成獣期の表現型解析を進める予定である。
本成果により、hXYSRaの機能を明らかにする上で、 hXYSRaに対するhuman SRY発現下での転写因子調節作用について検討可能となった。この成果を用いて候補領域のエンハンサー機能の詳細を明らかにする予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
COVID-19流行・罹患などに伴い、実験履行が困難な時期があったため。またin vitro reporter assayに適切なコンストラクト検討に時間を要したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在候補としているhXYSRa領域の遺伝子発現調節機能の確認について、トランスジェニックマウスおよび培養細胞系でのレポーターアッセイを継続して解析を行う。さらに新たな課題を解決するため、mXYSRa/Enh13配列がhXYSRa配列に置換されたマウスにおいて、ヒトSRYを発現させたマウスの作製・解析を進め、hXYSRaによるSOX9の発現調節を生体で再構築することを目指す。
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| Causes of Carryover |
COVID-19流行に伴う緊急非常事態宣言発令や同罹患に伴い実験履行困難な時期が生じたこと、さらに実験計画でマウス解析に当初からの変更が生じ次年度以降に実験を延期したため。
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