2020 Fiscal Year Research-status Report
HPV関連中咽頭癌におけるDNA損傷修復系と内因性免疫因子APOBEC3の発現
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20K18299
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| Research Institution | 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター) |
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Principal Investigator |
甲能 武幸 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター), 聴覚・平衡覚研究部, 研究員 (90573410)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | HPV / 中咽頭癌 / DNA損傷修復系 / APOBEC / shRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究者の予備実験では、HPV陽性頭頸部癌の手術検体と細胞株を用いてDNA損傷修復系因子とAPOBEC3の発現および、その相互作用を検証する研究を行った。その結果、免疫蛍光染色とウエスタンブロットにより、HPV陽性頭頸部癌細胞においてATM経路の因子は発現の上昇を認めなかった一方、ATR経路とFA経路の因子およびAPOBEC3A/3Bのタンパクレベルでの発現上昇を認めた。Comet assayにより実際にHPV陽性癌細胞においてDNA損傷が亢進していることを確認した。当該年度の研究では、DNA損傷修復系因子とAPOBEC因子の発現に焦点を当てた。HPV陽性頭頸部癌細胞株を用いた免疫蛍光二重染色では、APOBEC3Bが核内に多く発現している細胞においてDNA損傷修復系因子も多くのフォーカスを核内に形成し、両者が連動して作用している可能性が示唆された。DNA損傷修復系とAPOBEC因子の発現の関係を検討するため、レンチウイルスベクターを用いたshRNAによるAPOBEC3Bノックダウン細胞を作成した。ウエスタンブロットにてAPOBEC3Bノックダウン細胞においてATR経路やFA経路の因子の発現も低下し、Comet assayで示すDNA損傷の程度も少なくなった。逆にFA経路の因子であるFANCD2をノックダウンさせるとAPOBEC3Bの発現も低下した。また、HPV陽性頭頸部癌細胞株にシスプラチンを投与してDNA損傷を誘導すると、APOBEC3Bの発現が増えた。これらのことから、DNA損傷修復系とAPOBEC3は双方向に作用しており、お互いの発現のトリガーとなっている可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究者の所属機関の異動に伴い、一部当初の計画より遅延が生じたが、当初の目標として掲げた内容は概ね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
所属機関で治療を行ったHPV関連中咽頭癌症例のうち、シスプラチン併用放射線治療に奏功した症例と抵抗性を示した症例を収集し、後方視的にDNA損傷修復系因子とAPOBEC因子の発現局在と量を解析する。奏功群と不応群はそれぞれ20例以上を想定しているが、症例数が多いほどより高いエビデンスとなりうるため、新規症例があれば適宜追加して研究期間を通して継続的に評価していく。両群において発現レベルに有意差を認める場合、治療効果の予測因子として活用しうるのみならず、難知症例に対しての治療の標的として検討する根拠となることが期待される。
また、ATR、FA、APOBEC3Bのノックダウン細胞に対しシスプラチン投与を行い、wild typeのHPV陽性中咽頭癌細胞への投与と比較して治療効果に差が生じるか検討する。
APOBEC3Bを選択的に阻害しうる薬剤は今のところ存在しないが、ATRおよびFA経路の阻害剤に関しては入手可能であるため、wild typeのHPV陽性中咽頭癌細胞に対し、ATR阻害剤 or FA阻害剤単独投与群、シスプラチン+ATR阻害剤 or Fシスプラチン+A阻害剤投与群、シスプラチン単独投与群で治療効果に差があるかも検討する。
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| Causes of Carryover |
消耗品の購入や学会発表の費用を計上していたが，研究者の所属施設が変更したことや、新型コロナウイルス感染拡大に伴う学会の中止などが影響し、使用額が減額した。今年度は予定通りの研究遂行の為、消耗品や試薬を中心とした物品購入を予定している。
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Research Products
(1 results)
