2020 Fiscal Year Research-status Report
わが国のＸ連鎖性網膜色素変性患者と女性キャリアのＱＯＬ向上を目的とした臨床研究
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20K18340
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
倉田 健太郎 浜松医科大学, 医学部附属病院, 助教 (20467244)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 網膜色素変性 / X連鎖性網膜色素変性 / 遺伝子解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
網膜色素変性症(RP)は遺伝性網膜疾患の１つで、これまで約80個の原因遺伝子が報告されている。遺伝形式は常染色体優性、常染色体劣性、X連鎖性遺伝（XL）があり、孤発例も多く存在する。RPの中でXLRPの重篤度は高く、原因遺伝子として主にRPGR、RP2が報告されている。
現在、RPに対する有効な治療法は存在しないが、欧米ではRPGRに対する遺伝子治療の治験が臨床応用に向けて進行している。この治療の適応に原因遺伝子の特定が必須である。更に治療効果の判定に疾患の長期的な自然経過の理解が必要である。本研究はX連鎖性遺伝が疑われるRP患者、または重篤な臨床像を呈しているRP患者を中心に症例収集を行い、遺伝子解析を行う。遺伝子解析の結果、XLRPの原因遺伝子が同定された患者の詳細な臨床検査を行い、臨床データの蓄積を行う。
本年度は収集済みRP患者に既報のRPの原因遺伝子を解析対象としたターゲットシークエンス解析を実施した。症例は67歳女性。弟が5歳時にRPと診断されている。10歳時から夜盲を自覚し、15歳時に近医眼科でRPと診断を受けた。遺伝子検査を希望し60歳時に当院を受診した。初診時の矯正視力は右(0.1)、左(0.1)。両眼底に骨小体様色素沈着や網膜血管狭窄、視神経委縮などの典型的な網膜色素変性症の所見に加えて黄斑部の萎縮を認めた。視野検査では、両眼ともに耳側視野が残存した求心性視野狭窄を認めた。光干渉断層計では網膜は全体的に菲薄化し、ellipsoid zoneは高度に障害されていた。7年の経過で矯正視力は右(0.1)、左(0.07)へ低下し、求心性視野狭窄は進行し、中心10°となった。遺伝子検査の結果、PDE6Aにc.1957C>T:p.(R653*)をホモ接合性変異で同定した。PDE6A異常による本症例は典型的なRPの眼底所見を示し、視機能障害は比較的重篤であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究はわが国のX連鎖性遺伝が疑われるRP患者、または重篤な臨床像を呈しているRP患者の収集を行い、次世代シーケンサーを用いた遺伝子解析を行う。遺伝子解析の結果、XLRPの原因遺伝子が同定された患者の詳細な臨床検査を行い、臨床データの蓄積を行う。本研究で蓄積した遺伝情報と臨床情報の利活用により、臨床の場で自然経過に伴う視機能の予測が可能となり、RP患者のQOL向上が期待できる。そこで本年度は以下の研究を実施した。
（1）X連鎖性遺伝が疑われるRP患者、または重篤な臨床像を呈しているRP患者の収集 本年度は新たにX連鎖性遺伝が疑われる2家系を収集した。症例１は男児。症例２は女性であるが家系内に男性罹患者がおりキャリアの可能性を考えて収集した。XLRPは主に男性が罹患し、発症が早く、重篤な臨床像を呈することが特徴であるが、女性キャリアにおいても視覚障害が見られる事があり、無症状なものから重篤なものまで程度は様々である。また、重篤な臨床像を呈するRP患者としてRPにレーベル視神経症を併発した症例(症例3)を収集した。
（2）既報の網膜色素変性の原因遺伝子を解析対象としたターゲットシークエンス解析による変異探索 本年度は既に収集済みであった１家系のRP患者に対して既報の網膜色素変性とLeber先天盲の原因遺伝子74個を解析対象としたターゲットシークエンス解析を実施した。XLRPを疑った症例でも常染色体優性、常染色体劣性のRP原因遺伝子が同定される事があり、XLRPの確定診断の為にXLRP以外の既知のRP原因遺伝子のスクリーニングが必要である。ターゲット領域のライブラリー作成はHaloPlex(アジレント社)、シークエンサーはMiSeq(イルミナ社)を使用した。遺伝子検査の結果、PDE6Aから既知の変異であるc.1957C>T:p.(R653*)をホモ接合体で同定した。
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| Strategy for Future Research Activity |
来年度は本年度の下記研究を引き続き実施する。
（1）X連鎖性遺伝が疑われるRP患者、または重篤な臨床像を呈しているRP患者の収集
本年度と同様に症例の収集を進める。
（2）既報の網膜色素変性の原因遺伝子を解析対象としたターゲットシークエンス解析による変異探索
本年度に新規で収集したX連鎖性遺伝が疑われるRP患者2家系（症例１,２）とRPにレーベル視神経症を併発した症例(症例3)について変異探索を行う。本研究で実施しているターゲットシークエンスによる遺伝子解析は、RPとLeber先天盲の原因遺伝子を解析対象としているが、来年度から遺伝子解析の方法をターゲットシークエンス解析から全エクソームシークエンス解析に変更する。これによりRPの原因遺伝子だけではなく、遺伝性網膜変性の原因遺伝子やその他関連遺伝子の変異について検討が可能となり診断率の向上が期待出来る。代表者は一部の症例について全エクソームシークエンス解析を実施して原因遺伝子を同定した経験があり、直ぐに研究を実行する事ができる。また、RPGRは本研究で用いる遺伝子検査法では変異検出が困難な領域(ORF15)が存在しており、その領域のみ別途サンガー法にて変異探索を行う。
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| Causes of Carryover |
本年度は計画通りに予算を執行したが、一部試薬が予定よりも安価で購入できた為に31000円の繰越額が生じた。
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