2020 Fiscal Year Research-status Report
歯周病菌のIX型分泌機構関連遺伝子を持つオペロンの役割と病原性への関与
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20K18475
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
小野 晋太郎 岡山大学, 歯学部, 客員研究員 (80866517)
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2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | Porphyromonas gingivalis / IX型分泌装置 / ジンジパイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
口腔内細菌Porphyromonas gingivalisは主要な病原因であるジンジパインをIX型分泌装置から分泌する。しかし，IX型分泌機構の構成タンパク質や分泌機構の詳細については未だ解明されていないところがある。
我々は，P. gingivalis ATCC33277株のゲノム上に存在する，PGN_0297からPGN_0301までの遺伝子によって構成されるPGN_0296オペロンに着目し，研究を行ってきた。以前に，このオペロン中のPGN_0300遺伝子の遺伝子産物はIX型分泌装置が正常に働くために必要で，ジンジパインが正常に分泌されて機能するためにも必要であること，またPGN_0297遺伝子もジンジパインが正常に働くために必要であることを報告した。
今年度は，このオペロンに含まれるPGN_0296遺伝子とPGN_0298遺伝子の検討を行った。まず，P. gingivalis ATCC33277株を親株として，ゲノム上に存在するPGN_0296遺伝子とPGN_0298遺伝子のそれぞれを相同組換えにより破壊することを試みた。その結果，両遺伝子それぞれの破壊株の作製を行うことができた。PGN_0296遺伝子破壊株の作製においては，その作製効率に問題はなかった一方で，PGN_0298遺伝子破壊株の作製効率は極めて低かった。PGN_0296遺伝子についてはさらに，PGN_0296遺伝子破壊株にPGN_0296遺伝子発現プラスミドを導入することで相補株を得た。PGN_0296遺伝子破壊株とその相補株を親株と比較したところ，ジンジパイン活性はいずれの株においても差は見られなかったが，PGN_0296遺伝子破壊株の増殖速度は低下していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
初年度で予定していたPGN_0296オペロンの機能未知遺伝子の変異株の作製において，やや遅れていると思われる。
現在までにPGN_0296オペロンの機能未知遺伝子のうち，PGN_0296遺伝子の欠損株と相補株の作製およびPGN_0298遺伝子欠損株の作製に成功しているが，PGN_0301に関しては現在作製中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
PGN_0296オペロンの機能未知の遺伝子のうち，PGN_0298については相補株を作製する。その後，欠損株と相補株の性状解析を行う。また，PGN_0301についてもその遺伝子欠損株と相補株の作製に着手し，作製後それらの性状解析を行う。
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| Causes of Carryover |
次年度使用が生じたのは，新型コロナウイルス感染症蔓延のため研究室の使用が制限されたことによることが大きい。次年度への繰越金は，初年度で進捗の遅れた部分を補完するために必要であり，次年度の助成金と合わせて研究推進のために使用する予定である。
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