2021 Fiscal Year Research-status Report
歯周組織の血管内皮細胞から産生されるHMGB1が全身疾患へ及ぼす影響の解明
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20K18535
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
青柳 浩明 岡山大学, 歯学部, 客員研究員 (10814501)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | HMGB1 / 歯周炎 / マクロファージ / 全身疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々はこれまでに，歯周炎にHMGB1が関わっていることを，歯周炎モデルマウスを用いて明らかにした。しかし，HMGB1の抗炎症効果が歯周炎における様々な免疫 反応のどの経路に作用するのかは不明なままである。また，近年では，HMGB1とマクロファージの分化の関係について注目されているため，歯周炎組織においても影響があるのではないかと考え，研究を行なっている。
本研究では，骨髄由来の単球細胞にHMGB1刺激が加わると，M1マクロファージへの分化が促進されて，歯周炎における炎症反応を制御するのではないかと仮説を立て，HMGB1が歯周炎に及ぼす影響をマクロファージのM1タイプに着目して検討している。In-vitro：野生型マウス（WT）由来の骨髄単球細胞をマクロファージへ分化させ，Lipopolysaccharide，rhHMGB1，抗HMGB1抗体を添加した。48時間後にM1 マクロファージへの極性化度を解析している。In-vivo： WT，マクロファージ特異的HMGB1ノックアウトマウス（LysMCre/+-Hmg1f/f），抗HMGB1抗体腹腔内投与マウス（Anti-HMGB1）を用いて，絹糸結紮歯周炎モデルを作製した。3日後に，①抗HMGB1抗体の歯周組織への移行（Anti-HMGB1），②腹腔内マクロファージのM1 への極性化度，③歯周組織中のM1への極性化度と局在，④歯槽骨吸収度，⑤歯肉中のIl-6とCxcl2の遺伝子発現を調べている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マクロファージ特異的HMGB1ノックアウトマウス（LysMCre/+-Hmg1f/f）を作製し実験を行う予定だった。しかし，マクロファージ特異的HMGB1ノックアウトマウス（LysMCre/+-Hmg1f/f）の作製 および確立に時間がかかってしまった。令和4年度はマウスを作製準備が整ったため研究を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
マクロファージ特異的HMGB1ノックアウトマウス（LysMCre/+-Hmg1f/f）を用いたマウスおよびコントロールマウスを用いて歯周炎モデルマウスを用いて，分子イメージン グによる炎症の定量，μCTを用いた新生骨の定量，組織切片を用いた免疫染色を行う。また，組織より骨髄を採取しフローサイトメトリー を用いて遊走細胞の機能解析を行う。
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| Causes of Carryover |
計画通りに執行できたが端数が生じたため，次年度使用が生じた。令和4年度は急遽，骨髄細胞を採取しフローサイトメトリーを用いて遊走細胞の機能解析を実施する必要があったため，その費用に充当する予定である。
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