Development of human olfactory receptor-expressing cell array for comprehensive quantification of all odorants

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18H05359
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 黒田 俊一 大阪大学, 産業科学研究所, 教授 (60263406)
• Project Period (FY): 2018-06-29 – 2021-03-31
• Keywords: 嗅覚受容体

Outline of Annual Research Achievements

(1)全ヒト嗅覚受容体（約400種類）に対する発現ベクターを構築した。ヒト嗅覚受容体は７回膜貫通型Gタンパク質共役型受容体であるので、動物細胞発現においてエンドソーム膜に対する正しいトポロジーを保つ必要がある。本研究では、従来のウシロドプシン由来シグナル配列（約20アミノ酸残基）に加えて、最近明らかになった切断型シグナル配列Lucyタグ（約10アミノ酸残基）をN末端側に融合して、ほぼ全ての嗅覚受容体を正しいトポロジーで発現させるた。(2)セルアレイ用基板への該ベクターの印刷を行った。固相遺伝子導入法により、上記ベクターを遺伝子導入試薬と混合しセルアレイ用基板（直径500μmウェルで構成）にDNA印刷機で印刷した。(3)嗅覚受容体発現用細胞の作製した。嗅覚受容体の発現を促すシャペロン群（RTP1S, Ric8）、嗅覚受容体専用Gタンパク質（Galfa/olf）、嗅覚受容体が駆動するcAMP依存性Caチャネル（CNG）を安定発現するHEK293細胞を作製した。(4)ヒト嗅覚受容体発現細胞アレイを完成させた。(5)ヒト嗅覚受容体発現細胞アレイによる匂い分子解析を行った。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

全く計画どおりに進行している。

Strategy for Future Research Activity

予定通りに進める。