2022 Fiscal Year Research-status Report
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20K21323
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| Research Institution | Ishihara Sangyo Kaisha,Ltd. (Central Research Institute) |
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Principal Investigator |
森 光太郎 石原産業株式会社 中央研究所, 生物科学研究室, グループリーダー (40344840)
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| Project Period (FY) |
2020-07-30 – 2024-03-31
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| Keywords | 生物農薬 / ミヤコカブリダニ / 共生微生物 / マイクロバイオータ / 16S rRNAメタゲノム解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度も引き続き天敵ミヤコカブリダニの共生微生物叢を解析した。まず、虫体の部位ごとに細菌叢に違いがあるかどうかを調べることを試みた。人為共生化させるベクターの選択にこの情報は有用である。カブリダニは微小なため、解剖死して部位ごとにサンプルを分けるのが難しい。そこでカブリダニ体表洗浄処理の有無、飢餓処理の有無での細菌叢の違いや糞に見られる細菌叢を比較解析した。その結果、上記処理による細菌叢のOTU数（40から60）や分類群構成割合に大きな違いはなかった。すなわち部位ごとに細菌叢に大きな違いはないと考えられた。
次に、抗生物質処理を施したカブリダニの細菌叢を解析した。抗生物質処理すると、検出されるOTU数は減少し、その細菌叢の多様度も低下した。今回は抗生物質処理時間を24時間としたが、処理時間を増加した場合に細菌叢がどのように変化するか、またホストであるカブリダニにどのような変化が起こるかを調べて、細菌叢の機能も調べる必要がある。
最後に、カブリダニの微生物叢から培養可能な微生物を分離することを試みた。上記のように体表洗浄処理、飢餓処理を施した雌成虫を破砕して細菌用の寒天培地に塗りつけ、培養後に出現したコロニーを回収して16S rRNAアンプリコン解析に供した。他にカブリダニを歩かせた寒天培地上に出現したコロニーやカブリダニの糞自体からもDNAを抽出して解析した。その結果、検出されたOTU数は10から15程度で多様度も小さかった。具体的にはSerratia属、Staphylococcus属などが検出された。これらは処理間、糞内の構成ともよく似ていた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
微生物叢の解析が進捗した。またカブリダニの微生物叢に培養可能な細菌が存在することを確認し、その分類群も明らかにすることができた。一方、完成には至らなかったが、カブリダニに微生物を取り込ませる手法については、より効率的な吸汁系の構築を試みた。
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| Strategy for Future Research Activity |
ミヤコカブリダニの共生微生物叢の解明については、検出された細菌叢の機能の解析を進める。また、部位ごとに細菌叢に違いがないことが示唆されたが、さらに微小な部位ごとに違いがあるかどうか、細菌類の局在を明らかにするなど、さらなる解析が必要と考えている。
培養可能な細菌類については、再現性を確認する。さらに単離して種の同定を試みる。培養方法の検討も必要である。
カブリダニによる大腸菌摂食、観察系の確立と人為淘汰系については、まず、今年度所属先で導入する蛍光実体顕微鏡での観察系を構築する。次に蛍光ビーズを用いてカブリダニが取り込み可能なサイズの特定をする。さらに蛍光タンパク発現大腸菌を取り込ませる実験系とその観察系の構築を試みる。
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| Causes of Carryover |
・新型コロナ感染症流行を受けて、委託解析サンプル調製用試薬の納品遅延が発生し、解析委託の完了が次年度まで繰り下がることとなった。
・次年度は、上記の【今後の研究の推進方策】で述べたように、微生物叢の機能面の解析や種の同定を行うため、試薬の購入を行う計画である。人為選択系の構築に向けて、微生物培養消耗品、自機関で新規購入した顕微鏡で観察するための資材を購入する計画である。得られた成果を学会で発表する予定である。
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